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Cat. Number

HK21499-48S

Chemical Name

HK21499-48S 土壤中性蛋白酶测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

检测原理：

中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，在680nm有特征吸收峰。

需要的仪器，耗材:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、台式离心机

3、可调式移液器

4、微量玻璃比色皿/96孔板

5、研钵/匀浆器

6、水浴锅

7、磁力搅拌器

8、1.5 mL EP 管

9、冰和蒸馏水

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50 目筛。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前取1 瓶加入6 mL 试剂R1，沸水浴搅拌溶解后待用，用不完的试剂可以2-8℃保存4 周；

2、标准液：20 μmol/mL 酪氨酸溶液。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、标准溶液的配制：取10μL 20μmol/mL酪氨酸标准液，加入990μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.2μmol/mL标准液使用，现用现配。（实验中每管需要44μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、样本测定

1.5mLEP管中分别加入下列试剂：

试剂名称（μL）	测定管	对照管	标准管	空白管
风干土样（g）	0.05	0.05
试剂R1	50	50
试剂R2	100	-
充分混匀后，37℃水浴/恒温培养箱中反应24h，期间振荡5-6 次，使土样与反应液充分接触。
试剂R3	100	100
试剂R2	-	100
混匀，10000rpm 室温离心10min，取上清液待测。
上清液	44	44
0.2μmol/mL标准液	-	-	44	-
蒸馏水	-	-	-	44
试剂R4	130	130	130	130
试剂R5	26	26	26	26
充分混匀，40℃水浴或恒温培养箱培养10min，10000rpm 室温离心10min，取200μL 上清液于680nm下读取各管吸光值A，分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。（标准管、空白管只需测1-2 次，每个测定管需设一个对照管。）