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Cat. Number

HK21489-48S

Chemical Name

HK21489-48S 土壤亚硝酸还原酶测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的关键酶之一，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原酶类，可将NO2-还原为NO，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。

测定原理：

亚硝酸还原酶可将NO₂^-还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO₂^-减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、研钵、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱烘干，过30-50 目筛。

二、试剂准备

1、试剂R1：临用前加入1mL 蒸馏水充分溶解，2-8℃保存2 周。临用前根据用量用蒸馏水稀释100 倍，现用现配；

2、试剂R2：临用前加15mL 蒸馏水备用，2-8℃保存2 周；

3、试剂R3：临用前加15mL 蒸馏水溶解，此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。用不完的试剂2-8℃保存2周；

4、标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠标准液。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、标准液的稀释：将标准液用蒸馏水稀释至0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL的标准液。备注：实验中每个标准管需100μL 标准溶液。

3、样本测定：

试剂名称(uL)	无基质管	空白管1	对照管	测定管	标准管	空白管2
风干土样(g)	-	-	0.05	0.05	-	-
蒸馏水	-	100	100	-	-	-
试剂R1	100	-	-	100	-	-
试剂R2	100	100	100	100	-	-
充分混匀后，25℃水浴准确反应3h
试剂R3	100	100	100	100	-	-
旋涡震荡30s，10000rpm，4℃，离心10min
上清液	100	100	100	100	-	-
标准品	-	-	-	-	100	-
试剂R4	100	100	100	100	100	100
试剂R5	100	100	100	100	100	100
蒸馏水	-	-	-	-	-	100
充分混匀，室温放置15min后吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定540nm各管吸光值，分别记为A无基质管、A空白管1、A对照管、A测定管、A标准管和A空白管2，计算ΔA测定=（A无基质管-A空白管1）-（A测定管-A对照管），ΔA标准=A标准管-A空白管2（标准曲线、无基质管、空白管1、空白管2只需做1-2次）。