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Cat. Number
HK21485-96S
Chemical Name
HK21485-96S 土壤硝态氮测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/96S
References

硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素,土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一,其含量直接关系到作物的产量与品质。


检测原理:

在浓酸条件下,NO3-可以与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,后者在PH>12的条件下呈黄色,在一定范围内,其颜色深浅与含量成正比,可比色测定计算得硝态氮含量。


需自备的仪器和用品:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、台式离心机

3、水浴锅

4、微量玻璃比色皿/96孔板

5、可调式移液枪

6、研钵/匀浆器

7、浓硫酸

8、冰和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称
规格保存条件
试剂R1粉剂×2 支2-8℃
试剂R2液体×1瓶2-8℃
标准品粉剂×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(具体比例可以参考文献)

按照士壤质量(g);蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g十样,加入lmL蒸馏水)加入

蒸馏水,置于振荡仪中振荡提取 1h,10000g,25℃离心 10min,取上清待测。(土样要求参考注意事项123)。

二、试剂准备

1、试剂R1:临用前根据用量每支加入1mL 浓硫酸充分溶解。配制好后尽快使用,2-8℃可保存一周。

2、标准品:10 mg 硝酸钾,临用前加入1.386mL 蒸馏水溶解,配成1000 μg/mL 的NO3-N 标准液,2-8℃可保存2周。

三、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至410nm,分光光度计蒸馏水调零。

2. 标准溶液的稀释:取25uL1000ug/mLNO3-N标准液,加入975uL蒸馏水,充分混匀,配制成25ug/mL标准液使用,现用现配。(实验中每管需要 8uL,为减小实验误差,故配制大体积)。

3. 操作表

试剂(uL)测定管标准管空白管
样本8--
标准溶液-8-
蒸馏水--8
试剂R1121212
                                                     充分混匀,25℃静置30min
试剂R2280280280
混匀,涡旋振荡,使出现的沉淀充分溶解,取200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定410nm 处吸光值A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

四、植物NO3-N 的计算

NO3- N含量(μg/g 土样)=ΔA测定÷(ΔA标准÷C标准)×V提取÷W

W:样本质量,g;

C标准:标准溶液浓度;

V提取:样本总体;

Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。


注意事项

1、胶体不吸硝酸根离子,目其易溶于水,在士壤内部移动,所以测定多个样本或者重复样本室注意保持相同的采样深度。

2、土壤经风干或者烘干很容易引起硝态氮含量的变化,所以建议采用新鲜土壤进行测定。样品采集后应于 4℃下密封运输和保存,并在 3d 内分析完毕。否则,应于-20℃(深度冷冻)下以小块、小份保存,样品中硝酸盐氮可以保存数周。当测定深度冷冻的硝酸盐氮含量时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在4h内完成样品解冻、匀质化和提取,如果在 4C下解冻,解冻时间不应超过 48 h。

3、如果要比较不同样本间的硝态氮含量,需将十样烘干,按干重计算后再进行比较。

4、试剂R1和试剂R2均具有强腐蚀性,操作时需做好防护措施。

5、如果吸光值大于 1.5,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。


本试剂盒仅供科研使用!


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