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| Cat. Number | HK21483-48S |
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| Chemical Name | HK21483-48S 土壤硝酸还原酶(S-NR)测试盒 (酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 测定意义： 土壤硝酸还原酶S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。 测定原理： S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ+NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋+H2O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α -萘胺定量生成红色偶氮化合物；未反应的NADH会抑制后续的显色反应，用PMS将其中和后再进行后续反应；生成的红色偶氮化合物在520nm 有最大吸收峰，可用分光光度计/酶标仪测定。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、恒温培养箱/水浴锅、台式离心机、可调式移液器、30-50目筛、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或37 度烘箱风干，过30~50 目筛。 二、试剂准备 1、试剂R5：如出现结晶析出，60℃水浴溶解后使用； 2、标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至520nm，分光光度计用蒸馏水调零。 2、NaNO2标准液的配制：用蒸馏水将标准品稀释1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL。备注：实验中每个标准管需50μL标准溶液。 4、样本测定：在1.5mL EP管中操作。
混匀，显色20min后，取200μL至微量玻璃比色皿/96孔板，520nm下读取各管吸光值，分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。计算ΔA测定=A测定- A对照，ΔA标准=A标准-A空白。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需检测1-2次。 四、S-NR活性计算 1、标准曲线绘制： 以1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL标准溶液为横坐标（x轴），ΔA标准为纵坐标（y轴）绘制标准曲线，得到线性回归方程y=kx+b，将ΔA测定代入方程得到x（μmol/mL）。 2、S-NR活性计算： 单位的定义：每g土样每天中产生1μmol NO2ˉ的量为一个S-NR活力单位。 S-NR（U/g 质量）=x×V标准÷W÷T V标准：反应体系中加入的标准液体积； W：风干土样，g； T：反应时间，1d。 注意事项： 1、试剂R1、试剂R2和试剂R4在冰上放置，用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。 2、ΔA测定过小（小于0.01），可延长反应时间（37℃水浴时间）。 3、当ΔA大于1时，可以将上清液用蒸馏水稀释后，再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。 本试剂盒仅供科研使用! |
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