HK21477-48S 土壤脱氢酶(SDHA)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，被还原为三苯基甲臜Triphenyl Formazone，TF），TF呈现红色，在波长485nm处有最大吸收峰，在485nm测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质）、研钵、30-50目筛、天平、恒温培养箱/水浴锅、低温离心机、冰、蒸馏水、乙酸乙酯（不允许快递）。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1A	粉剂×2瓶	2-8℃
试剂R1B	粉剂×2支	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶（自备）	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1．土壤样本：准确称取过30-50目筛的新鲜土壤样本约0.05g（以保证TTC与土壤颗粒充分接触）。

2．污泥样本：污泥用蒸馏水洗涤，12000rpm，25℃，离心10 min，弃上清，反复3- 4次。

二、试剂准备

1、试剂R1：临用前取一支试剂R1B 加入一瓶试剂R1A 中，加入2.5 mL 蒸馏水溶解。现配现用。配制好后避光保存于2-8℃，最好在一周内使用，若出现红色，则不能使用（2.5mL 可以加25 次）。

2、试剂R3：自备乙酸乙酯。提供一个15mL 试剂瓶。

三、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至485nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 操作表（在EP管中依次加入下列试剂）:

试剂名称(uL)	对照管	测定管
样本（g）	0.05	0.05
试剂R1	-	100
试剂R2	200	100
充分混匀，置于37℃水浴锅/恒温培养箱中，暗培养24h，取出后立即冰浴5min
试剂R3	300	300
剧烈震荡10min，15000rpm，4℃，离心10min，取200μL上清，于微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯材质），测定对照管和测定管的OD值，分别记为A对照、A测定。计算ΔA=A测定-A对照。注：每个测定管需设一个对照管。