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Cat. Number

HK21473-96S

Chemical Name

HK21473-96S 土壤酸性磷酸酶(S-ACP)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。

测定原理：

酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，在660nm处检测，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、30-50 目筛、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯（不允许快递）。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50 目筛。

2. 称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL 甲苯（自备），轻摇15min；加0.4 mL 试剂R1并且摇匀后，置于37℃水浴锅/恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时间后迅速加入1mL 试剂R2充分混匀，以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心10min，取上清液置于冰上待测。

二、试剂准备

1、试剂R2：用前加50 mL 蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8 周；

2、试剂R4：临用前取1 瓶加576 μL 无水乙醇（自备），24 μL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可以2-8℃保存2 周（变褐色后不能再使用）；

3、标准品：0.5 μmol/mL 苯酚标准液。

三、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长到660nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 操作表：在微量玻璃比色皿/96 孔板中操作

试剂名称	空白管	标准管	测定管
试剂R1	10	-	-
标准液	-	10	-
上清液	-	-	10
试剂R3	40	40	40
试剂4	4	4	4
充分混匀，显色后再加蒸馏水
蒸馏水	146	146	146
混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A 空白管、A 标准管、A 测定管。空白管只需做1-2 次。注意：空白管和标准管只需要测定1-2 次。