HK21460-48S 土壤羟胺还原酶(HR)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21460-48S

Chemical Name

HK21460-48S 土壤羟胺还原酶(HR)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨，土壤中的还原态化合物可作为氢的供体，其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失，间接影响氮肥的利用效率。

检测原理：

硫酸铁铵中的 Fe³⁺可将羟胺氧化为氮气，自身被还原为 Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸条件下与邻菲罗啉形成橙红色配合物，在 510nm 处有吸收峰，羟胺还原酶作用于羟胺，使配合物形成量减少，510nm 处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、天平、水浴锅、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、30-50目筛、漩涡震荡仪、氮吹仪、研钵、蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献）

新鲜土样自然风干或37℃烘箱烘干，过30-50 目筛。

二试剂准备：

1、试剂R2：临用前取1 瓶加入2.5mL 蒸馏水充分溶解备用，用不完的试剂可以2-8℃保存一周；

2、试剂R3：临用前沸水浴中加热15min，开盖10s 后立即拧紧盖子，待自然冷却后再使用。使用过程中尽量不要敞口放置，取完立即加盖拧紧。若长期敞口放置，可再次沸水浴10min（盖盖儿）冷却至常温使用；

3、试剂R4：临用前加10mL 蒸馏水溶解，此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。用不完的试剂2-8℃保存2周；

4、标准品：临用前加1.028mL 蒸馏水充分溶解，制备140μmol/mL 盐酸羟胺标准溶液待用，2-8℃保存2 周。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至510nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、标准液的稀释：将140μmol/mL标准液用蒸馏水稀释至4.375、2.1875、1.094、0.547、0.2735、0.13675μmol/mL的标准液备用。备注：实验中每个标准管需40μL 标准溶液。

3、样本测定（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）

试剂名称（uL）	对照管	测定管	无基质管	标准管	空白管
风干土样（g）	0.02	0.02	-	-	-
试剂R1（μL）	-	40	40	-	-
标准溶液（μL）	-	-	-	40	-
蒸馏水（μL）	40	-	-	-	40
试剂R2	40	40	40	40	40
试剂R3	120	120	120	120	120
混匀后，用氮气（N2）流排除管中空气，立即密封，置于30℃水浴锅反应1h
试剂R4	80	80	80	80	80
充分震荡10min，8000rpm，25℃，离心10min
上清液	20	20	20	20	20
试剂R5	40	40	40	40	40
试剂R6	20	20	20	20	20
试剂R	20	20	20	20	20
蒸馏水	100	100	100	100	100
充分混匀，置于25℃水浴锅，显色10min，于微量玻璃比色皿/96孔板中测定510nm处吸光值，记为A对照管、A测定管、A无基质管、A标准管和A空白管。计算ΔA测定=（A无基质管-A空白管）-（A测定管-A对照管），ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管（标准曲线、无基质管和空白管只需做1-2次）。