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Cat. Number
HK21456-48S
Chemical Name
HK21456-48S 土壤脲酶(UE)测试盒 (酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

S-UE 能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。


测定原理: 

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的 NH3-N。



需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、研钵、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂R1液体2 mL×1 瓶(自备)2-8℃
试剂R2粉剂×2 瓶2-8℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃
试剂R4 A液液体×1 支2-8℃
试剂R4 B液液体×1 瓶2-8℃
试剂R5液体×1 瓶2-8℃
标准品液体×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50 目筛。

二、试剂准备

1、试剂R1:自备甲苯;

2、试剂R2:临用前取1 瓶加入2.7 mL 蒸馏水,充分溶解待用,用不完的试剂2-8℃保存4 周;

3、试剂R4:临用前将A 液和B 液按体积比1:4 混合待用;用多少配多少;

4、试剂R5:液体置于试剂瓶内EP 管中,使用前需先离心。临用前加入5.7 mL 蒸馏水,混匀,待用;用不完的试剂2-8℃保存两周;

5、标准品:1 mg/mL 氮标准液。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至630nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2、培养

试剂名称(uL)测定管对照管
风干土样(g)0.050.05
试剂R12020
                                                      振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min
试剂R290-
蒸馏水
-90
试剂R3190190
                          混匀,放入37℃水浴或恒温培养箱培养24h 后,10000g 常温离心10min,取上清液。

3、将培养结束的上清液稀释10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸馏水)。若最终计算得到的ΔA仍大于1则继续稀释。

4、标准品的准备:吸取适量的标准溶液,用蒸馏水稀释至10、8、6、4、2、1、0.5、0(空白管)μg/mL。备注:实验中每个标准管需120μL 标准液。

5、测氨量(在微量玻璃比色皿或96孔板中加入下列试剂)

试剂名称(uL)测定管对照管标准管
稀释后的上清液120120-
标准品--120
试剂R4404040
试剂R5404040
                                                                                  充分混匀,室温放置20min

充分混匀,微量玻璃比色皿需要用蒸馏水调零,96 孔板不需要调零,于630nm 处读取吸光值A,分别记为A测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管,每个测定管设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2 次。

四、S-UE活力计算

1、标曲绘制

标准曲线的建立:根据标准管的浓度(x,μmol/L)和吸光度ΔA 标准(y,ΔA 标准),建立标准曲线。根据

标准曲线,将ΔA 测定(y,ΔA 测定)带入公式计算样本浓度(x,μmol/L)。

2、S-UE活力计算

单位的定义:每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

S-UE活力(U/g 土样)=x×10×V反总÷W÷T

10:稀释倍数;

T:反应时间,1d;

V反总:反应体系总体积;

W:样本质量。


本试剂盒仅供科研使用!


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