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Cat. Number
HK21454-96S
Chemical Name
HK21454-96S 土壤木质素过氧化物酶(S-LiP)测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/96S
References

木质素过氧化物酶(EC1.11.1.14)是一种含亚铁血红素的过氧化物酶,属于木质素降解酶系,在木质素生物降解、造纸工业、纺织工业、芳香化合物转化与降解及环境污染控制等方面具有较大的应用潜力。


测定原理:

木质素过氧化物酶氧化藜芦醇生成藜芦醛,在 310nm 处有特征吸收峰。


需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、水浴锅、震荡仪、研钵、甲苯(不允许快递)、乙醇(不允许快递)、30-50目筛、蒸馏水。


产品组成:


试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R2粉剂×1 瓶2-8℃
试剂R3液体×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50 目筛。

二、试剂准备

1. 试剂R2:临用前取1瓶加入2.5mL乙醇溶解,用不完的试剂可以2-8℃保存2周,实验前再将试剂R2用乙醇稀释10倍备用,用多少配多少。(1瓶粉剂溶解后可做100T,为了延长使用时间,此产品多给1瓶粉剂)

2. 试剂R3:使用前请离心再用。取2μL 试剂R3加入1mL 蒸馏水充分混合备用(约66T 的量),现用现配,也可根据样本量按比例配制。

三、测定步骤

1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上,波长调至310nm,紫外分光光度计蒸馏水调零。

2. 样本测定:

试剂名称(uL)测定管对照管
土样(g)0.030.03
甲苯1515


                                                                             室温静置15min
试剂R1240240
试剂R230-
试剂R315-
                                                                  30℃水浴反应1h后立刻煮沸5min。
试剂R2
-30
试剂R3-15
12000g常温离心10min。取200μL上清于微量石英比色皿中或96孔UV板中测定310nm处的吸光值,分别记为A测定管、A对照管,计算ΔA=A测定管-A对照管。

四、酶活计算公式

A、按微量石英比色皿计算:

酶活性定义:每克土壤每分钟生成1nmol 藜芦醛所需的酶量为一个酶活力单位。

S-LiP活性(U/g 土样)=ΔA÷(ε×d) ×109×V反总÷W÷T=0.538×ΔA÷W

ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.3mL=3×10-4L;W:

土样质量,g;T:反应时间,60min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。

B、按96孔UV板计算:

酶活性定义:每克土壤每分钟生成1nmol 藜芦醛所需的酶量为一个酶活力单位。

S-LiP活性(U/g 土样)=ΔA÷(ε×d) ×109×V反总÷W÷T=0.896×ΔA÷W

ε:藜芦醛摩尔消光系数:9300L/mol/cm;d;96孔板光径,0.6cm;V反总:反应总体积,0.3mL=3×10-4L;W:

土样质量,g;T:反应时间,60min;109:单位换算系数,1mol=109nmol。


本试剂盒仅供科研使用!

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