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| Cat. Number | HK21445-24S |
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| Chemical Name | HK21445-24S 土壤几丁质酶测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/24S |
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| References | 几丁质来源非常丰富，是自然界中仅次于纤维素的第二大类生物高聚物，由于其分解非常缓慢而大量堆积容易造成环境严重污染。几丁质酶是影响土壤中氮矿化的一种重要的酶，其分解几丁质控制着氮循环的关键步骤。 测定原理： 几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm 处有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了几丁质酶的活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、低温离心机、可调式移液器、旋涡振荡混匀仪、1mL玻璃比色皿、研钵、30-50 目筛、蒸馏水与甲苯（不允许快递）、水浴锅/恒温培养箱。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样风干，过30-50 目筛。称取约0.1g 土样，加入0.05mL 试剂一，混匀，常温静置15min。静置结束后，加入0.2mL 试剂R2与0.4mL 试剂R3，37℃振荡反应24h，8000rpm，4℃离心10min（若离心后上清中仍有杂质，建议将上清再次离心，至澄清），取上清液置于冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R1：自备甲苯。 2、试剂R3：悬浊液，使用前摇匀。 3、试剂R4：刚从低温（2-8℃）条件取出会有晶体析出，加热使其溶解即可。 4、试剂R5：临用前取1 瓶加入12mL 试剂R5B，充分溶解，现配现用。用不完的试剂2-8℃可以保存4 周。 5、标准液：5mg N-乙酰氨基葡萄糖。临用前加入1mL 试剂R2配制成5mg/mL 的标准溶液，即5000μg/mL 的标准溶液，2-8℃可以保存4 周。 三、测定步骤 1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至585nm，用蒸馏水调零。 2、标准品溶液的配制：临用前将5000μg/mL 的标准溶液用试剂R2稀释80 倍至62.5 μg/mL 标准溶液备用。取25μL 5000μg/mL 的标准溶液，加1975μL 试剂R2，充分混匀，配制成62.5μg/mL 标准液使用，现用现配。（实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。） 3、在EP 管中进行以下操作：
四、土壤几丁质酶活性计算 酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。 土壤几丁质酶活性（U/g 土样）=（ΔA 测定÷ΔA 标准×C 标）×V 反总÷W÷T C 标：标准管的浓度； V 反总：样本处理总体积； W：样本质量，g； T：反应时间，1d。 注意事项： 1. 反应结束后立即进行比色。 2. 试剂R5有一定的毒性，试验操作时做好个人防护。 3. 当A 测定大于1 时，建议将样本上清液用试剂R2稀释后再进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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