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Cat. Number
HK21444-48S
Chemical Name
HK21444-48S 土壤过氧化物酶(S-POD)试剂盒(酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

S-POD 主要来源于土壤微生物,能够氧化土壤有机物质产生过氧化物,在腐殖质的形成过程中具有重要作用。


测定原理:

S-POD 催化有机物质氧化成醌,后者在 430nm 有特征光吸收。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、0.5mol/L HCl溶液、微量玻璃比色皿/96孔板、30-目筛、乙醚(不允许快递)、研钵、冰和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂R1粉剂×2 瓶2-8℃
试剂R2液体×1 瓶2-8℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃
试剂R4液体×1 瓶(自备)2-8℃
标准品液体×1 瓶2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 

新鲜土然风干37℃烘箱过30-50目筛。

二、试剂准备

1、试剂R1:临用前加入5.5 mL蒸馏水,用不完的试剂2-8℃保存一周;

2、试剂R4:自备乙醚;

3、标准品:相当于每1mL乙醚相中含有0.2mg/mL紫色没食子素。

三、测定步骤

1、 标准品处理:将标准品用0.5 mol/L HCl溶液稀释至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL。

2、 标曲测定:分光光度计预热30min以上,调节波长至430nm,0mg/mL管调零,直接测定稀释后各标准管的吸光度,记为A标准。

3、样本测定:

试剂名称(uL)测定管对照管
风干土样(g)0.020.02
蒸馏水-20
试剂R1100100
试剂R220-
                                                                    振荡混匀,置于30℃水浴锅准确反应1 h
试剂R35050
试剂R4430430
振荡数次,室温静置30min,取0.2mL上层液于430nm 处测定吸光值A,记为A测定管、A对照管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管。(若使用分光光度计则使用试剂四调零)。注:每个测定管需设一个对照管。

四、S-POD活力计算

1、标准曲线的建立

根据标准管的浓度(y,mg/mL)和吸光度A标准(x,A标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(x)带入公式计算测定中样本的浓度y值(mg/mL)。

2、S-POD活力计算

单位的定义:每天每g土样中产生1mg紫色没食子素定义为一个酶活力单位。

S-POD活力(U/g 土样)=y×V提取相÷W÷T

T:反应时间,1h=1/24d;

V提取相:提取相总体积;

W:样本质量,0.02g。


注意事项:

每个样本均需做对照管。


本试剂盒仅供科研使用!

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