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Cat. Number
HK21441-24S
Chemical Name
HK21441-24S 土壤过氧化氢酶(S-CAT)测试盒(紫外分光光度法)
Qty 1
50T/24S
References

土壤过氧化氢酶S-CAT 是土壤微生物代谢的重要酶类,在 H2O2清除系统中具有重要作用。 


测定原理: 

H2O2在 240nm 下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即可反应 S-CAT 活性的高低。


需要的仪器,耗材:

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV板)、研钵、30~50目筛和蒸馏水。


产品组成:


试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R2粉剂×1 支2-8℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、 样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50目筛。

二、试剂准备

1、 试剂R1:液体置于试剂瓶内EP管中,使用前需将EP管先离心。临用前取0.05 mL试剂R1加入9.95 mL蒸馏水稀释待用或者按比例配制。用不完的试剂8℃保存一周;

2、 试剂R2:临用前加入2mL 蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂2-8℃保存4周。

三、 测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至240nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2、 加样表(1.5ml EP管):

试剂名称(uL)测定管无基质管无土管
风干土样(g)

0.1

0.1-
试剂R11000-1000
蒸馏水-1000-

                                                                                     25℃振荡培养20min 

试剂R2252525
                                                                 混匀8000g,25℃离心5min,取全部上清
试剂R3120120120

混匀,240nm处记录各管吸光值A。(每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做1-2管)

四、 S-CAT活性计算

单位的定义:每天每g风干土样催化1mmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

计算公式:S-CAT(U/g 土样)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷(ε×d)×103]÷W÷T

V反总:反应体系总体积;

ε:过氧化氢摩尔消光系数,43.6 L/mol/cm;

d:比色皿光径,1cm;

T:反应时间,20 min=1/72d;

W:样本质量。


注意事项:

如果吸取的上清仍有部分浑浊,可以在加入试剂R3后统一再次进行离心。


本试剂盒仅供科研使用!

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