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Cat. Number
HK21435-24S
Chemical Name
HK21435-24S 土壤淀粉酶(S-AL)测试盒(可见分光光度法)
Qty 1
50T/24S
References

淀粉酶(EC321.1)是催化淀粉水解的一类酶的总称。土壤中的淀粉酶主要来自于微生物, 是一种重要的酶制剂,广泛应用于粮食加工、食品、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业。 


测定原理:

淀粉酶水解淀粉产生还原糖,可与3,5-二硝基水杨酸反应生成红棕色物质,在540nm处有特征吸收峰,颜色深浅在一定范围内与还原糖量成正比。


需自备的仪器和用品:

天平、恒温培养箱/水浴锅、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿/96孔板、30~50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R2粉剂×1 瓶2-8℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃
标准品
粉剂×1 瓶2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50 目筛。

二、试剂准备

1、试剂R2:临用前取1 瓶加入5 mL 蒸馏水,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌或震荡至粉剂溶解,用不完的试剂2-8℃保存一周。

2、标准品:10 mg 麦芽糖。临用前加入1.38 mL 蒸馏水配制成20 μmol/mL 的储备液,2-8℃保存两周。

三、测定步骤

1.分光光度计预热30min,波长调至540nm,用蒸馏水调零。

2. 将20μmol/mL的麦芽糖储备液用蒸馏水稀释为1、0.9、0.8、0.6、0.4、0.3μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表:

试剂名称(uL)测定管对照管标准管空白管
土样(g)0.10.1--
甲苯2020--
蒸馏水-200--
试剂R1
200200--
试剂R2200---
充分震荡混匀, 37℃水浴或37℃恒温箱培养24h, 之后12000rpm,常温离心10min,取上清。

上清液300300--
蒸馏水---300
标准溶液--300-
试剂R3700700700700
充分混匀,沸水浴10min,置于冰上冷却,于1mL玻璃比色皿中测定540nm 处的吸光值,分别记为A 测定管、A 对照管、A 标准管和A 空白管,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A空白管。(标准曲线和空白管只需测1-2 次)

四、土壤淀粉酶活力的计算

1、标准曲线的绘制:

根据标准管的浓度(x,μmol/L)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,μmol/L)

2、酶活的计算:

单位的定义:每天每g土样产生1μmol还原糖定义为一个土壤淀粉酶活力。

S-AL(U/g 土样)= x×V反总÷W÷T

V反总:酶促反应总体积;

W:土样质量,g;

T:反应时间,1d。


注意事项:

1、当ΔA 大于1.5 时,建议将上清液稀释后再进行测定,注意在计算公式中乘以稀释倍数。

2、若ΔA 测定较小,增加反应的上清液体积或适当增加酶促反应时间,计算酶活时对公式进行修改。

3、建议每次实验煮沸后的冷却时间保持一致,吸光值请于30min 内测定完成。


本试剂盒仅供科研使用!

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