HK21433-24S 过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒（钼酸铵法）(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21433-24S

Chemical Name

HK21433-24S 过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒（钼酸铵法）(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

过氧化氢酶CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。

测定原理：

H2O2 可与钼酸铵反应形成稳定的黄色复合物，在405nm 处有强烈吸收峰，且其吸光值大小与过氧化氢浓度成正比。通过测定反应体系中剩余的H2O2 量，得出被CAT 催化分解的H2O2 量，进而反映CAT 的活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、恒温水浴锅、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌、细胞或组织样本的制备：

a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔9s，重复30 次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

b、组织：按照组织质量（g）: 提取液体积(V)=1: 5~10（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前取1 瓶试剂R2加入17.5mL 蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂4℃保存一周。

2、20μmol/mL 标准液的配制：标准品置于试剂瓶内EP 管中，使用前需先离心。本试剂盒所提供标准品为1mmol/mL H2O2 标准溶液，临用前取0.2mL 标准品加入9.8mL 试剂R1稀释或者根据样本量按照比例配制，充分混匀，即为20μmol/mL 标准液，现配现用。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。

2、测定前将20μmol/mL 标准液与试剂R1在25℃水浴10min 以上。

3、加样表：

试剂名称(uL)	测定管	对照管	空白管	标准管
样本	60	60	-	-
提取液	-	-	60	60
标准液	300	-	-	300
试剂R1	-	300	300	-
混匀，25℃水浴锅中准确反应10min。
试剂R2	540	540	540	540
混匀，室温静置10min，于1mL玻璃比色皿中测定405nm 处吸光值，分别记为A测定、A对照、A 空白、A 标准。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白，ΔA=ΔA 标准-ΔA 测定。空白管和标准管只需做1-2 次。