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Cat. Number
HK21429-24S
Chemical Name
HK21429-24S 土壤β-葡萄糖苷酶(S-β-GC)测试盒(可见分光光度法)
Qty 1
50T/24S
References

土壤β-葡萄糖苷酶S-β-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。


测定原理:

S-β-GC能够催化对-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30~50目筛、冰、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。


产品组成:


试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1 瓶(自备)2-8℃
试剂R2粉剂×2 瓶-20℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃
试剂R4液体×1 瓶2-8℃
标准液液体×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37 度烘箱风干,过30~50 目筛。

二、试剂准备

1、试剂R1:自备甲苯;

2、试剂R2:临用前取1 瓶加入10 mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂建议-20℃分装保存4 周;

3、标准液:5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液;

4、标准液的准备:取100 μL 标准液,加入到400 μL 试剂R3中,得到1 mmol/L 标准液(即1000 μmol/L),再用蒸馏水十倍稀释到100 μmol/L。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min 以上,调节波长至400nm,用蒸馏水调零。

2、用蒸馏水倍比稀释:50、25、12.5、6.25μmol/L。100、50、25、12.5、6.25μmol/L 做标准液。

3、加样表:

试剂名称(uL)测定管对照管标准管空白管
风干土样(g)0.050.05--
试剂R12525--
                                                        振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置15min
试剂R2400---
试剂R3500500--
                 混匀,37℃水浴/恒温培养箱1h 后,立即沸水浴煮沸5min(盖紧缠封口膜,防止水分散失),流水冷却
试剂R2-400--
                                                                充分混匀,10000g 常温离心10min,取上清液
上清液500500--
标准液--500-
蒸馏水---500
试剂R41000100010001000

充分混匀,室温静置2min 后,测定400nm 处吸光值A,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=标准定管-A 空白管。(每个测定管设一个对照管)

四、S-β-GC 酶活的计算

1、标准曲线建立:

根据标准管的浓度(y,μmol/L)和吸光度ΔA 标准(x,ΔA 标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(x,ΔA 测定)带入公式计算样本浓度(y,μmol/L)。

2、S-β-GC 酶活的计算:

单位的定义:每天每g 土样中产生1μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-β-GC 酶活(U/g 土样)=y×V 反总÷W÷T

T:反应时间,1h=1/24d;

V 反总:反应体系总体积:3×10-4L;

W:样本质量,0.02g。


本试剂盒仅供科研使用!


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