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Cat. Number
HK21427-24S
Chemical Name
HK21427-24S 土壤α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)测试盒(可见分光光度法)
Qty 1
50T/24S
References

S-α-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。


测定原理:

S-α-GC能够催化对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400nm 有特征光吸收。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1 支(自备)2-8℃
试剂R1粉剂×2 瓶-20℃
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
标准品液体×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干,过30~50 目筛。

二、试剂准备

1、试剂R1:自备甲苯,2-8℃保存;

2、试剂R2:临用前取1瓶加入10 mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂-20°C分装保存4周;

3、标准品: 5 mmolL的对硝基苯酚溶液。

三、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上,调节波长至400nm,分光光度计蒸馏水调零。

2、标准品:取20uL 5mmolL的对硝基苯酚溶液,加入980uL蒸馏水,充分混匀,配制成100umolL标准液使用,现用现配。(实验中每管需要500uL,为减小实验误差,故配制大体积。)

3、加样表:

试剂名称(uL)测定管对照管标准管空白管
风干土样(g)0.10.1--
试剂R12525--
                                                                      振荡混匀,使土样润湿,室温放置15min
试剂R2400---
试剂R3500500--
                              混匀, 37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水/冰浴冷却。
试剂R2-400--
                             混匀, 37℃水浴1h 后,立即沸水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水/冰浴冷却。
上清液500500--
标准品--500-
蒸馏水---500
试剂R41000100010001000

充分混匀,室温静置2min 后,测定吸光值A,分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA=A 测定管-A对照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管设一个对照管。标准管和空白管只需做1-2次。

四、S-α-GC 活力计算

单位的定义:每天每g土样中产生1μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-α-GC活力(U/g 土样)=ΔA÷ (ΔA标准÷C标准)×V反总÷W÷T

T:反应时间,1h=1/24d;

V反总:反应体系总体积:1.85×10-4L;

C标准:标准溶液浓度,100μmol/L;

W:样本质量,g。


注意事项:

若ΔA<0.01,可延长37℃水浴时间;若δa>1.5,可将上清液稀释后进行测定;最后计算时注意各个因素的改变。

本试剂盒仅供科研使用!

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