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Cat. Number

HK21424-96S

Chemical Name

HK21424-96S 甜菜碱测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

甜菜碱是一种广泛分布于动植物及微生物体内的季铵型水溶性生物碱，是生物体内胆碱的氧化产物，可以增强免疫力、降血脂、抗氧化、抗肿瘤，并可作为甲基供体，参与促进动物蛋白质和脂肪代谢、增进食欲、缓和应激、调节渗透压、稳定维生素等多种生物作用，在化工、医药、食品添加剂等领域有较广泛的应用。

测定原理：

甜菜碱在强酸条件下和雷氏盐发生反应产生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成红色溶液，在525nm处有特征吸收峰，测定525nm处的吸光值，可计算得样品的甜菜碱含量。

需自备的仪器和用品：

台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、甲醇、乙醚、浓盐酸（37%）、蒸馏水、30-50目筛。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

取烘干后过30-50 目筛的样本约0.2g，加1mL 提取液，置于60℃提取30min，期间不断震荡。用镊子加入约3mg试剂四后充分震荡，10000rpm，25℃，离心15min，取上清液，于70℃挥发甲醇(大约剩余0.2mL，务必将甲醇挥发干净)，之后用水定容至1mL。

二、试剂准备

1、提取液：自备80%甲醇。取80 mL 甲醇，加20 mL 蒸馏水；

2、试剂R1：临用前根据用量配制，每瓶加15mL 蒸馏水，用浓盐酸（37%）调pH为1，搅拌45min，过滤后用水定容至20 mL；

3、试剂R2：自备乙醚；

4、标准品：临用前加入1 mL 蒸馏水，即得10 mg/mL 甜菜碱标准液。

三、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至525nm，试剂R3调零。

2、将10mg/mL 甜菜碱标准液依次稀释为9、8、7、6、5、4、3、2 mg/mL的标准溶液备用。

3、操作表：

试剂名称（uL）	测定管	标准管	空白管
样本	30	-	-
标准品	-	30	-
蒸馏水	-	-	30
试剂R1	300	300	300
充分混匀，4℃中反应2h，8000rpm，25℃，离心15min，弃上清
试剂R2	300	300	300
8000rpm，25℃，离心10min，弃上清。置于通风橱使试剂二自然挥发干净
试剂R3	300	300	300
震荡使沉淀充分溶解，吸取0.2mL 于微量玻璃比色皿或96 孔板中测定A 标准管、A 测定管和A 空白管，计算ΔA 标准=A 标准管-A 空白管， ΔA 测定=A 测定管-A 空白管。