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| Cat. Number | HK21418-96S |
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| Chemical Name | HK21418-96S 糖原合成酶(GCS)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 糖原合成酶（Glycogen synthase , GCS）将UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端，以α-1,4糖苷键连接。GCS是动物机体糖原合成过程的限速酶，同时也是胰岛素作用的主要靶酶，在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。 测定原理： 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率200w，超声3 秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 血清等液体：直接检测。 二、试剂准备 1、工作液的配制：临用前将试剂R3、试剂R4和试剂R5转移到试剂R1中混合溶解后待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存1 周。 2、试剂R8的配制：临用前在试剂R8中加入5mL 试剂R2充分溶解，再将试剂R6和试剂R7转移到试剂R8中混合溶解后待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存1 周。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、临用前将工作液与试剂八置于37℃水浴锅中预热5min（工作液用多少预热多少）。 3、操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：
四、GCS 酶活计算 A、按微量石英比色皿计算： 1. 按蛋白浓度计算 酶活定义：每毫克蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GCS酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷（V样×Cpr）÷T 2. 按样本质量计算 酶活定义：每克样本每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GCS酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷（V样×W÷V样总）÷T 3. 按照细菌或细胞数量计算 酶活定义：每104个细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GCS酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T 4. 按液体体积计算 酶活定义：每毫升液体每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GCS酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷V样÷T ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； 109：单位换算系数，1mol=109nmol； V反总：反应体系总体积； V样：反应体系中样本体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V样总：加入提取液体积； T：反应时间：1min。 B、按96孔UV板计算： 将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔UV板光径）进行计算即可。 注意事项： 1、样本提取上清液置于冰上待测，提取样本建议当天测完。 2、若ΔA大于0.2，建议将样本用提取液稀释适当倍数后测定，以提高检测灵敏度，并在计算公式中乘以相应的稀释倍数。 本试剂盒仅供科研使用! |
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