HK21417-48S 糖原合成酶(GCS)测试盒(紫外分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21417-48S

Chemical Name

HK21417-48S 糖原合成酶(GCS)测试盒(紫外分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

糖原合成酶（Glycogen synthase , GCS）将UDPG的糖基加到原有糖原或是糖原蛋白的非还原端，以α-1,4糖苷键连接。GCS是动物机体糖原合成过程的限速酶，同时也是胰岛素作用的主要靶酶，在糖代谢及维持血糖相对稳定的过程中有着重要作用。

测定原理：
GCS催化UDPG和葡萄糖残基生成糖原和UTP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映GCS活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R4	粉剂×2 瓶	-20℃
试剂R5	粉剂×2瓶	-20℃
试剂R6	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R7	粉剂×2 瓶	-20℃
试剂R8	粉剂×2 瓶	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率200w，超声3 秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

血清等液体：直接检测。

二、试剂准备

1、试剂R4：提供一个5 mL试剂瓶，用前取1支加入3mL试剂R1充分溶解，-20°C分装保存4周，避免反复冻融;

2、试剂R5：提供一个5 mL试剂瓶，用前取1支加入3mL 试剂R1充分溶解，-20°C分装保存4周，避免反复冻融;

3、工作液的配制：临用前将试剂R3离心，取20uL试剂R3，加14 mL试剂R1、3 mL试剂R4、3mL 试剂R5，充分混合（约26T)，现用现配，也可根据样本量按比例配制;

4、试剂R8的配制:

(1)临用前取1瓶试剂R8中加入6mL试剂R2充分溶解，再将1支试剂R7转移到试剂R8中混合溶解后待用，可-20C分装保存4周，避免反复冻融;

(2)用前先将试剂R6离心，取55uL试剂R6加入5.74 mL 上述(1）中溶液，充分混合（约28T)，现用现配，也可根据样本量按比例配制。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、临用前将工作液与试剂八置于37℃水浴锅中预热5min（工作液用多少预热多少）。

3、操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：

试剂名称	空白管	测定管
样本	-	50
蒸馏水	50	-
试剂R8	750	750
工作液	200	200
加入样本即开始计时，充分混匀后于340nm 处测定10s 时的吸光值A1 和1min 10s 时的吸光值A2，计算ΔA 测定管= A1 测定-A2 测定，ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管（空白管只需做1-2 次）。