服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21415-48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21415-48S 糖原含量测试盒(可见分光光度法) |
||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
50T/48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。 测定原理： 蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下，糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm 处有最大吸收。 需要的仪器，耗材: 1、可见分光光度计/酶标仪 2、台式离心机 3、可调式移液器 4、微量石英比色皿/96孔板 5、研钵、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 一、样本处理 1﹑细胞或细菌 收集500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入0.75mL提取液超声波破碎 细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；转移至10mL试管中，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧，防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃ 离心10min，取上清液待测。 2﹑组织 称取0.1~0.2g样本，置于10mL试管中；加入0.75mL提取液，置于沸水浴中煮沸20min（盖紧，防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5mL，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。 二、试剂准备 1. 试剂R1：10 mg葡萄糖。临用前加1 mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存两周。 2. 工作液的配制 临用前取1瓶试剂R2倒入3 mL蒸馏水，缓慢倒入12 mL浓硫酸，充分溶解混匀后使用。用不完的的试剂2-8℃保存一周。 三、 测定步骤 1．分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，分光光度计蒸馏水调零。 2．试剂R1稀释：取5μL 10mg/mL葡萄糖标准液，加入995μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.05 mg/mL葡萄糖溶液备用，现用现配。 备注：实验中每管需要250μL，为减小实验误差，故配制大体积。 3．加样表（在 EP 管中反应）：
混匀，沸水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取1000μL转移至微量比色皿中，于620nm波长处，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为A空白、A标准和A测定。（空白管和标准管只要测1-2次） 四、 糖原含量的计算 1、 按照样本质量计算 糖原（mg/g 质量）= (C标准×V样)×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷(W×V样÷V总) ÷1.11 2、 按照样本蛋白浓度计算 糖原(mg/mg prot)= (C标准×V样)×(A测定-A空白) ÷(A标准-A空白) ÷(V样×Cpr) ÷1.11 3、按照细菌或细胞数量计算 糖原（mg/104 cell）= (C标准×V样)×(A测定-A1)÷(A标准-A空白)÷(细菌或细胞数量×V样÷V总) ÷1.11 1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即111μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100μg糖原用蒽酮所试剂显示的颜色； C标准：标准管浓度； V样：加入反应体系中待测样本体积； V总：样本总体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 细菌或细胞数量：以104为单位，万个。 注意事项： 如果吸光值大于1.4，建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
||||||||||||||||||||||||||||||||
下一个：糖原含量测试盒(酶标板法)上一个：糖化酶测试盒(酶标板法) |
|||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
