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Cat. Number

HK21413-24S

Chemical Name

HK21413-24S 糖化酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

糖化酶，即葡萄糖淀粉酶（EC3.2.1.3），又称γ-淀粉酶，是一种外切型糖苷酶，它从淀粉的非还原性末端水解α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键，将淀粉完全水解为葡萄糖，因此广泛的应用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有机酸，甘油，淀粉糖等工业中，是我国重要的工业酶制剂之一。

测定原理：

糖化酶水解可溶性淀粉生成葡萄糖，与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色化合物，在540nm处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与葡萄糖的量成正比，可测定计算得糖化酶的活力。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、研钵/匀浆器，超声破碎仪、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤:

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1．按照组织质量（g)∶提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

2．细胞：按照细胞数量(10⁴个)：提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体：直接检测。（若有沉淀则离心后测定)

二、试剂准备

1、试剂R1：临用前取1瓶加入20 mL提取液，充分混匀后沸水浴直至溶解（约10min)，2-8℃保存4周;

2、标准品: 10 mg 无水葡萄糖，临用前加1mL提取液溶解为10 mg/mL 的葡萄糖标准品备用，2-8℃保存两周;

三、测定步骤

1.分光光度计预热30min 以上，调节波长至.540nm，蒸馏水调零。

2.标准品准备：将标准品用蒸馏水稀释至1.5、1.0、0.8、0.4、0.2、0.1mg/mL。实验中每个标准管需50uL标准溶液。

3.吸取50uL样本于1.5mLEP管中沸水浴5min作为对照管的灭活样本。

4.加样表：

试剂名称(uL)	对照管	测定管	空白管	标准管
灭活样本	50	-	-	-
样本	-	50	-	-
蒸馏水	-	-	50	-
标准品				50
试剂R1	500	500	500	500
充分混匀，40℃反应20min后沸水浴5min，常温10000g离心10min。
上清液	500	500	500	500
试剂R2	500	500	500	500
混匀，沸水浴5min，流水冷却后，测定540nm处吸光值A，计算ΔA测=A测定管-A对照管，ΔA标=A标准管-A空白管。标准管和空白管只需做1-2次。