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Cat. Number

HK21410-96S

Chemical Name

HK21410-96S 酸性土壤速效磷测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。

测定原理：

用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷，钼蓝与磷酸根生成660nm 有特征吸收峰的物质，通过测定660nm 光吸收，即可计算磷含量。

需自备的仪器和耗材：

1、可见分光光度计/酶标仪

2、天平

3、台式离心机

4、微量玻璃比色皿/96孔板

5、可调式移液枪

6、30-50目筛

7、漩涡震荡仪

8、研钵

9、EP管

10、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	常温
标准品	液体×1 支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（具体比例可以参考文献）

新鲜土样风干，过30-50 目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：10-20 的比例（建议称取约0.05g土样，加入1mL 提取液），振荡提取1h，10000g，25℃离心10min，取上清液待测。

二、试剂准备

1、试剂R1：临用前加入5 mL 蒸馏水，溶解后2-8℃保存一周；

2、试剂R2：临用前加入5 mL 蒸馏水，溶解后2-8℃保存一周；

3、标准品：10 μmol/mL 标准磷贮备液；

4、工作液（定磷剂）的配制：按H2O：试剂R1：试剂R2：试剂R3=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至660nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、将10μmol/mL标准液用提取液稀释为3、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL的标准溶液备用。

3、标准溶液的配制表：

序号	稀释前浓度（μmol/mL）	标准液体积（μL）	提取液体积（μL）	稀释后浓度（μmol/mL）
1	10	150	350	3
2	10	100	400	2
3	2	250	250	1
4	1	250	250	0.5
5	0.5	250	250	0.25
6	0.25	250	250	0.125
7	0.125	250	250	0.0625

4、样本测定

1.5mL离心管中或96孔板依次入下列试剂：

试剂名称(uL)	测定管	标准管	空白管
样本	20	-	-
标准溶液	-	20	-
提取液	-	-	20
工作液	180	180	180
充分混匀，25℃静置30min
将液体置于微量玻璃比色皿/96孔板中，测定660nm处吸光值A，分别记为A测定管、A标准管和A空白管，ΔA=A测定管-A空白管，ΔA标准=A标准管-A空白管（空白管只需测1-2次）。