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Cat. Number

HK21408-48S

Chemical Name

HK21408-48S 酸性木聚糖酶测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

木聚糖酶(EC3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，酸性木聚糖（ACX）一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。

检测原理：

ACX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算ACX活力。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、可调式移液枪、冰、蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
缓冲液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1 支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 发酵液：发酵液于8000rpm，4℃，离心15min，取上清，作为待测样本。

2. 酶干粉：称约1mg，加1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释10 倍待测。

3. 组织样本：称约0.1g 组织，加入1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心15min，取上清蒸馏水稀释10 倍待测。

二、试剂准备

1、试剂R1：临用前加入6mL 蒸馏水，4℃保存3 个月。

2、标准品：10mg 木糖。临用前加入667μL 缓冲液配成100μmol/mL 的标准品溶液，2-8℃保存8 周。

三、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，可见分光光度计蒸馏水调零。

2、标准品稀释：取20μL 100μmol/mL木糖标准液，加入980μL缓冲液，充分混匀，配制成2μmol/mL的木糖标准液备用，现用现配。（实验中每管需要60μL，为减小实验误差，故配制大体积。）

3、样本测定：（在EP管中加入下列试剂）

试剂名称（uL）	对照管	测定管	空白管	标准管
样本	60	60	-	-
标准液	-	-	-	60
缓冲液	90	90	150	90
试剂R1	-	60	60	60
混匀，50℃水浴中反应30min，立即沸水浴中10min灭活。（注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系）
试剂R1	60	-	-	-
试剂R2	90	90	90	90
试剂R3	30	30	30	30
混匀，沸水浴中显色5min（注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系），冷却后吸取200μL至96孔板或比色皿中，尽快测定各管540nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。空白管和标准管只需做1-2次。