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| Cat. Number | HK21398-96S |
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| Chemical Name | HK21398-96S 双缩脲法蛋白含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。 测定原理： 强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物；紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。该方法适用于蛋白质浓度高的样本，尤其是动物材料。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、液体样本：澄清无色液体样本可以直接测定。 2、组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样本常常需要稀释） 3、细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 二、试剂准备 提取液：自备。根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。 2、操作表：在0.5mL EP管中依次加入 空白管：取0.5mL EP管，加入40μL蒸馏水，200μL试剂R1，混匀后室温静置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，记为A空白管。 3、标准管：取0.5mL EP管，加入40μL标准液，200μL试剂R1，混匀后室温静置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，记为A标准管。 4、测定管：取0.5mL EP管，加入40μL待测液，200μL试剂R1，混匀后室温静置15min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板，540nm比色，记为A测定管。
注意：空白管和标准管只需测定1-2 次。 四、样本中蛋白质浓度计算 1、按液体体积计算： 蛋白质（mg/mL）=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) 2、按样本质量计算： 蛋白质（mg/g 质量）=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) × V样总÷W 3、按细胞数量计算： 蛋白质（mg/104 cell）=C标准管÷(A标准管-A空白管)×(A测定管-A空白管) × V样总÷500 C标准管：5mg/mL； V样总：样本总体积； W：样本质量，g； 500：细胞总数，500万。 注意事项： 1、样本蛋白浓度须在0.25~12mg/mL范围内，低于0.25mg/mL不能用此法，高于12mg/mL须做相应稀释。因此测定前用1~2个样做预实验，确保蛋白浓度在0.25~12mg/mL范围内。 2、如果吸光值大于0.44，则需要将样本用蒸馏水稀释后再测定。 3、待测样本蛋白提取可用生理盐水、双蒸水或不含蛋白的PBS提取。该法受硫酸铵、Tris缓冲液干扰，提取液中应不含这些物质；否则改用BCA蛋白质含量测定试剂盒。 本试剂盒仅供科研使用! |
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