服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21389-24S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21389-24S 乳酸脱氢酶(LDH)测试盒(可见分光光度法) |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
50T/24S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 乳酸脱氢酶LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。 检测原理： LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，在450nm处检测，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 细菌、细胞或组织样本的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2. 血清（浆）样本：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前加入1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融； 2、标准品：2 μmol/mL 丙酮酸钠溶液。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。 2、标准品的制备：取100μL标准液，倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL做标准曲线。 3、样本测定
充分混匀，室温静置3min，450nm下测定吸光度，计算ΔA=A测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对照。 四、LDH 活力单位计算 1. 标准曲线的绘制：根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y为标准品浓度，μmol/mL；x为对吸光度（减去浓度为0的标准管的OD值）。 2. 计算样本丙酮酸的含量，即将ΔA 带入回归方程中(x)，计算y值。 3. 血清（浆）LDH活力的计算 单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/mL）=y×V样÷V样÷T×103 4. 细胞、细菌和组织中LDH活力的计算 （1） 按样本蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/mg prot）=y×V样÷（Cpr×V样）÷T×103 （2） 按样本质量计算 单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/g 质量）= y×V样÷（W÷V样总×V样）÷T×103 （3） 按细菌或细胞密度计算 单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。 LDH（U/104 cell）= y×V样÷（500÷V样总×V样）÷T×103 V样：反应体系中加入的样本体积； V样总：加入的提取液体积； T：反应时间，15min； Cpr：蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500万； 103：1μmol/mL=103nmol/mL。 本试剂盒仅供科研使用! |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
