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Cat. Number

HK21388-48S

Chemical Name

HK21388-48S 乳酸含量(LA)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

检测原理：

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质，在570nm处有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：

天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液1	液体×1 瓶	2-8℃
提取液2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 支	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R4	粉剂×1 瓶	-20℃
试剂R5	液体×1 瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1 支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按照质量（g）：提取液1体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液1）加入提取液1，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液2，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。

2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液1体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液1），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液2，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。

3. 血清（浆）：取100μL血清（浆）加入1mL提取液1，4℃ 12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.15mL提取液2，12000g离心10min后取上清待测。

二、试剂准备

1、试剂R2：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用前按试剂R2（V）：蒸馏水（V）=10μL：450μL 的比例配制试剂R2溶液，现用现配；

2、试剂R4：临用前每瓶加入3 mL 蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存4 周；

3、标准品：临用前加入1.04 mL 蒸馏水配成100 μmol/mL 的标准溶液；4℃保存4 周。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，波长调至570nm，分光光度计用乙醇调零。

2、标准液的稀释：将100μmol/mL的标准溶液用蒸馏水稀释为2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL的标准溶液待测。

3、加样表：

试剂名称（uL）	测定管	对照管	标准管	空白管
样本	10	10	-	-
标准品	-	-	10	-
蒸馏水	-	10	-	10
试剂R1	40	40	40	40
试剂R2	10	-	10	10
试剂R4	20	20	20	20
在EP 管中充分混匀，于37℃水浴准确反应20min。
试剂R5	6	6	6	6
试剂R3	60	60	60	60
37℃避光反应20min 后于25℃，10000rpm 离心10min，去上清，留沉淀。
乙醇	200	200	200	200
充分溶解沉淀后，于570nm 处测定吸光值，分别记为A 测定管，A 对照管，A 标准管，A 空白管，计算ΔA测定=A 测定管-A 对照管；ΔA 标准= A 标准管-A 空白管。