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| Cat. Number | HA11614-4w |
| Chemical Name | HA11614-4w 转染级 线性聚乙烯亚胺 线性PEI MW 40000 49553-93-7 |
| CAS Number | 49553-93-7 |
| Mol. Weight | 40,000 |
| Qty 1 |
1g |
| Qty 2 | 5g |
| Appearance | 白色至灰白色自由流动的固体 |
| Solubility | 溶于水， 不溶于常用有机溶剂 |
| Storage condition | 室温，避光干燥储存。 |
| References | PEI MAX 40K（在游离碱中也称为PEI 22K）是一种功能强大，值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂。在HEK293和CHO大多数表达系统中，PEI MAX都能提供稳定的高表达（96孔板至100L生物反应器）。现在每年有更多的研究人员和公司选择使用PEI MAX进行细胞转染，因为相对于大多数转染试剂而言 PEI MAX既能得到稳定的高表达又能使转染成本降低最少40%。上海惠诚生物现货提供转染级 线性聚乙烯亚胺 线性PEI MW 40000。 PEI MAX 比更PEI 25K易于使用，并且比PEI 25K有更高的转染效率，通常PEI 25K转染过程通常需要几个小时才能完成准备，而PEI MAX 40K可在两小时内完成整个转染过程。另外，PEI 25K含有4-11％的残留丙酰基，这可能阻碍聚合物主链与DNA的有效结合，而PEI MAX 40K的丙酰基完全脱落，意味着PEI MAX每批产品的性能更加稳定。 聚乙烯亚胺,线性聚乙烯亚胺,线性PEI配置方法： 1：称取100mg PEI MAX，加新鲜的细胞级别的水90ml，搅拌溶解。 2：调整pH值至7.0 ，定容至100ml，用0.22um的滤器过滤，分装后储存于4℃，保质期可以达到12个月。 转染操作流程： 一、稳转方法 1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。 2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /15 mL 离心管。 3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。 4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 5h 即可检测到转入基因的表达。 5.转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。 二、瞬时转染方法 1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。 2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他适合的无蛋白培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1.5-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液 的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。 3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴DNA-PEI复合物。转染 1.5 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。 4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后最快 5 h 即可检测到转入基因的表达。 请自行确定最适合检测时间。 |
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