HK21385-48S 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-1法)(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21385-48S

Chemical Name

HK21385-48S 超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒(WST-1法)(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

超氧化物歧化酶SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。

测定原理：

通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O₂^-)，O₂^-可与WST-1反应生成水溶性黄色甲臜，后者在450nm处有吸收峰；SOD可清除O₂^-，从而抑制了甲臜的形成；反应液黄色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、电子天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1支	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶	2-8℃
试剂R4	液体×1支	2-8℃

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1.细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10个)∶提取液体积(mL)=500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液)超声波破碎细菌或细胞（冰浴,功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)，8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2 组织样本：按照组织质量(g)∶提取液体积(mL)为1:5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3.血清（浆）样本：直接检测，若有浑浊可离心后取上清进行测定。

二、试剂准备

1、试剂R2：使用前先离心再吹打混匀，根据样本数量取试剂R2，用蒸馏水稀释100倍后使用，当天用完。

2、试剂R4：根据样本量将试剂R4用蒸馏水稀释10倍后使用，当天用完。

三、测定步骤

1.分光光度计预热30min 以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。

2.测定前将试剂R1、R3和R4 37°℃水浴5min 以上。

3．加样表（按顺序在EP管或96孔板中加入下列试剂)

试剂名称(uL)	测定管	对照管	空白管1	空白管2
样本	90	90	-	-
试剂R1	225	225	225	225
试剂R2	100	-	100	-
试剂R3	175	175	175	175
蒸馏水	360	460	450	550
试剂R4	50	50	50	50

充分混匀，37℃水浴30min后，置于1mL玻璃比色皿测定450nm处测定各管吸光值A。分别记为A测定、A对照、A1空白、A2，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA空白=A1空白-A2空白。（空白管1和空白管2各只需做1~2管；每个样本有一个对照管）

四、SOD活性计算

1、抑制百分率的计算

抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%

尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本或者提高加样表中的样本量，但需相应减少测定管和对照管中蒸馏水的体积。

2、SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。

3、SOD酶活性计算：

（1）血清（浆）

SOD活性（U/mL）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总] ÷V样×F

（2）组织、细菌或培养细胞SOD活力计算：

a.按样本蛋白浓度计算

SOD活性（U/mg prot）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总] ÷(V样×Cpr)×F

b.按样本质量计算

SOD活性（U/g 质量）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总] ÷(W×V样÷V样总)×F

c.按细菌或细胞数量计算

SOD 活力（U/104 cell）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总] ÷(500×V样÷V样总)×F

V反总：反应总体积；