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| Cat. Number | HK21382-48S |
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| Chemical Name | HK21382-48S 漆酶活性检测试剂盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一种环保型酶，其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。 测定原理： 漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、震荡仪、研钵、30-50目筛。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。 3、培养液：直接检测。 二、试剂准备 1、工作液的配制：一瓶试剂R2用10 mL 试剂R1溶解。现用现配。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至420nm，分光光度计蒸馏水调零。 2. 水浴锅温度调至45℃。 3. 操作表：在微量玻璃比色皿/96 孔板中分别加入下列试剂：
四、土壤漆酶（SL）活性计算公式 1．按微量玻璃比色皿： （1）按蛋白浓度计算 酶活定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×Cpr）÷T （2）按样本质量计算 酶活定义：每克样本每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×W÷V 样总）÷T （3）按细胞数量计算 酶活定义：每104 个细胞每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×500÷V 样总）÷T （4）按液体体积计算 酶活定义：每mL 液体每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。 漆酶酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷V 样÷T ε：ABTS 摩尔消光系数：36000L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V 反总：反应总体积； V 样：反应中样本体积； V 样总：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度需自行测定； W，样本质量，g； T：反应时间，3min； 500：细胞总数，500 万； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 2．按96 孔板计算： 将上述计算公式中的d-1cm 换为d-0.6cm（96 孔板光径）进行计算即可。 注意事项： 1、测定之前进行预实验，若吸光值较高（A>1.5），请减少土样质量再进行测定。若数值偏小可以延长反应时间 或增加土样质量进行测定。计算时注意相对应修改计算公式。 2、离心后若上清仍然浑浊，可再次离心去除。 本试剂盒仅供科研使用! |
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