HK21381-24S 漆酶测试盒(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

服务热线：13917250134「同微信」

您的位置：首页>>分析化学>>试剂盒>>HK21381-24S 漆酶测试盒(可见分光光度法)

产品中心

/ Products Classification 点击展开+

Cat. Number

HK21381-24S

Chemical Name

HK21381-24S 漆酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一种环保型酶，其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。

测定原理：

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、震荡仪、研钵、30-50目筛。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后4℃，10000g 离心10min，取上清置于冰上待测。

3、培养液：直接检测。

二、试剂准备

1、工作液的配制：一瓶试剂R2用25 mL 试剂R1溶解。现用现配。

三、测定步骤

1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。

2. 水浴锅温度调至45℃。

3. 操作表：

试剂名称(uL)	测定管	对照管
样本	150	-
蒸馏水	-	150
工作液	850	850
在1mL玻璃比色皿中分别加入上述试剂，充分混匀后于420nm 处测定10s 时的吸光值A1，迅速置于45℃水浴3min，拿出迅速擦干测定190s 时的吸光值A2，计算ΔA 测定管= A2 测定-A1 测定，ΔA 空白管=A2空白-A1 空白，ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管。（空白管只需做1-2 次）

四、土壤漆酶（SL）活性计算公式

1．按微量玻璃比色皿：

（1）按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×Cpr）÷T

（2）按样本质量计算

酶活定义：每克样本每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×W÷V 样总）÷T

（3）按细胞数量计算

酶活定义：每104 个细胞每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×V 反总×109÷（V 样×500÷V 样总）÷T

（4）按液体体积计算