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| Cat. Number | HK21380-96S |
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| Chemical Name | HK21380-96S 葡萄糖氧化酶(GOD)试剂盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 葡萄糖氧化酶GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。 测定原理： 葡萄糖氧化酶GOD催化产生H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，500nm波长检测，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1）组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 (2）细菌、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每 500万细菌或细胞加入lmL提取液，超声波破碎（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次)。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。 (3）血清（浆)：直接检测。 二、试剂准备 1、 工作液的配制：取15mL试剂R1和3mL试剂R2混匀（现配现用）； 2、试剂三：融化后可分装-20°C保存。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。 2、加样表:
样本测定前将GOD工作液与试剂R3放入37℃水浴中保温，然后将上述试剂按顺序加入微量比色皿/96孔板中，加样本的同时开始计时；在500nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1及2小时20秒时的吸光度A2。计算ΔA=A2-A1。 三、GOD活力单位的计算 a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T （2）按样本质量计算 单位的定义：每g组织在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/g 质量）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T （3）按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万细菌或细胞在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/104 cell）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(500÷V提取×V样)÷T （4）按血清（浆）体积计算 单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷T÷V样 V反总：反应总体积； V样：加入样本体积； V提取：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞数量，500万； d：光径，1cm； ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5mL/μmol/cm； T：反应时间，2h。 b.用96孔板测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T （2）按样本质量计算： 单位的定义：每g组织在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/g 质量）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T （3）按细菌或细胞数量计算 单位的定义：每1万细菌或细胞在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/104 cell）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷(500÷V提取×V样)÷T （4）按血清（浆）体积计算 单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每小时催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。 GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V反总÷T÷V样 V反总：反应总体积； V样：加入样本体积； V提取：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞数量，500万； d：光径，0.6cm； ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5 mL/μmol/cm； T：反应时间，2h。 注意事项： 1、 不同匀浆组织中GOD活力不一样，做正式试验之前请做1-2次预试验，若A2-A1>0.8，则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，使A2-A1<0.8，以提高检测灵敏度。实验过程中若出现a1>A2现象请将样本用提取液稀释成适当浓度。 2、 最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。 本试剂盒仅供科研使用! |
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