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Cat. Number

HK21377-48S

Chemical Name

HK21377-48S 葡萄糖脱氢酶(GCDH)测试盒(紫外分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

葡萄糖脱氢酶GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶，同时也是临床血糖测定的诊断用酶，可广泛用于食品工业及医药工业领域中。

测定原理：
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，利用NADH在340nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×1瓶	2-8℃
试剂R3	粉剂×2瓶	-20℃

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)为1∶5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。

细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（10⁴个)︰提取液体积(mL)为500~1000∶1的比例(建议500万个细胞或细菌加入1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞或细菌(功率20%或200W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

血清（浆）：直接检测。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前加入15 mL试剂R1溶解，用不完的试剂2-8C保存8周；

2、试剂R3：临用前每瓶加入5mL 试剂R1溶解，用不完的试剂建议分装后-20C避光可保存4周；

3、工作液的配制：按照试剂R1:试剂R2:试剂R3为4:3:2的体积比例充分混匀，现用现配，用前37℃预热10 min。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：

试剂名称	空白管	测定管
工作液	900	900
蒸馏水	100	-
样本	-	100
加入工作液即开始计时，立即混匀，于340nm处测定10s时的吸光值A1，迅速置于37℃水浴或培养箱1min(酶标仪有控温功能可将温度调至37℃)，拿出迅速擦干测定1min 10s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次)。

四、GCDH酶活计算

1.按样本蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟产生1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH酶活（U/mg prot）=ΔA÷ (εxd)×10xV反总÷(V样xCpr）÷T

2.按样本质量计算

酶活定义：每克样本每分钟产生1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH酶活（U/g质量）=ΔA÷ (εxd)×10xV反总÷(V样×W÷V样总）÷T

3.按细胞或细胞数量计算

酶活定义：每10个细胞每分钟产生1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH酶活(U/10' cel1)=ΔA÷(εxd)x10xV反总÷(V样÷V样总×细胞数量（万个))÷T

4.按液体体积计算

酶活定义：每mL样本每分钟产生1nmo1的NADH定义为一个酶活力单位。