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Cat. Number

HK21373-48S

Chemical Name

HK21373-48S 葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)测试盒(紫外分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

葡萄糖-6-磷酸酶(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）是一种水解磷酸化合物的磷酸酶，广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

测定原理：
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷，利用钼蓝法测定无机磷含量的增加，即可反映G6P活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×2瓶	2-8℃
试剂R3	粉剂×1瓶	2-8℃
试剂R4	粉剂×1瓶	2-8℃
试剂R5	液体×1瓶	2-8℃
标准品	液体×1瓶	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样本：直接检测。

二、试剂准备

1、试剂R3：临用前用8 mL 蒸馏水溶解备用。

2、试剂R4：临用前用8 mL 蒸馏水溶解备用。

3、标准品：10 μmol/mL 磷标准液。临用前用蒸馏水稀释16 倍至0.625 μmol/mL 的标准溶液备用。

4、工作液的配制：试剂R2中加入5 mL 试剂R1充分溶解备用。可以将工作液分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

5、定磷试剂的配制：按H2O:试剂R3:试剂R4:试剂R5（V:V:V:V）=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配。

注意：配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2、操作表：在1.5ml EP管中进行下列操作：

试剂名称（uL）	测定管	对照管	标准管	空白管
样本	40	40	-	-
工作液	160	-	-	-
充分混匀，37℃（哺乳动物）或者25℃（其他物种）水浴反应10min。反应后迅速放入沸水中沸水浴10min。取出冷却至常温			-	-
工作液	-	160	-	-
10000rpm常温离心10min后取上清。			-	-
上清液	100	100	-	-
标准溶液	-	-	100	-
定磷试剂	500	500	500	500
蒸馏水	400	400	400	500
充分混匀，40℃反应10min。测量660nm 处吸光值，测定管、对照管、空白管、标准管测定的吸光度分别记为A 测定管、A 对照管、A 空白管、A 标准管。计算ΔA=A测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。