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Cat. Number

HK21371-48S

Chemical Name

HK21371-48S 脯氨酸(PRO)含量测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

脯氨酸（Pro）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

测定原理：

用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色，在520nm 测定吸光度。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰乙酸、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细胞、细菌或组织样本的制备：

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次），之后置沸水浴振荡提取10min；10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

2、血清（浆）样本：取0.1mL 血清（浆）加入0.9mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取10 分钟，10000g，常温离心10 分钟，取上清，冷却后待测。

二、试剂准备

1．试剂R1：自备冰乙酸。

2．标准品：脯氨酸10 mg，临用前加入1mL 蒸馏水，配成10 mg/mL标准品。

三、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至520nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、标准品的处理：将标准品用蒸馏水稀释为40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL。

3、操作表：

试剂名称(uL)	测定管	标准管	空白管
上清液	500	-	-
标准品	-	500	-
蒸馏水	-	-	500
试剂R1	500	500	500
试剂R2	500	500	500
混匀后盖紧盖子，缠好封口膜，置于沸水浴中保温30min，每10min 振荡一次，冷却后在520nm 波长处比色，记录吸光值A 测定管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA=A 测定管-A 空白管，ΔA标准=A 标准管-A 空白管。空白管只需做1-2 次。