HK21367-48S 柠檬酸(CA)含量测试盒(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21367-48S

Chemical Name

HK21367-48S 柠檬酸(CA)含量测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

柠檬酸CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第一步反应的产物。

测定原理：

酸性条件下，柠檬酸还原 Cr6+生成 Cr3+，在 545nm 处有特征吸收峰；通过测定 545nm 吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 支	-20℃
试剂R4	粉剂×2 支	常温
试剂R5	液体×1 瓶	2-8℃
标准品	液体×1 瓶	2-8℃

实验步骤:

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1、液体样本中柠檬酸提取：取0.1mL液体加试剂R1 0.9mL，充分混匀，11000g，4℃离心10min，取上清液，待测。

2、组织中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1mL试剂R1，冰上充分研磨，11000g，4℃离心10min，取上清液，待测。

3、线粒体中柠檬酸提取：称约0.1g组织，加入1mL试剂R1，冰上充分研磨，600g，4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g，4℃离心10min，弃上清(此上清液可用于细胞质CA含量测定)；向沉淀中加试剂R2 200uL，以及试剂R3 2uL，充分悬浮溶解，11000g，4℃离心10min，取上清液，待测。

二、试剂准备

1、试剂R3：为易挥发试剂，用完后尽快密封，-20℃保存;

2、试剂R4：临用前取1支加入3mL试剂R1，充分溶解，用不完的试剂2-8℃保存2周。

3、标准品：1mmolL柠檬酸标准液。临用前用蒸馏水稀释成250umol/L柠檬酸标准液（将50uL 1mmol/L柠檬酸标准液和150uL蒸馏水混合即可)，现用现配。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min以上，调节波长到545nm，蒸馏水调零。

2、试剂R1置于30℃水浴中预热30min以上。

3、操作表（按下表在1.5mLEP管中加入相应试剂）:

试剂名称	空白管	测定管	标准管
蒸馏水	100	-	-
上清液	-	100	-
标准品	-	-	100
试剂R1	700	700	700
试剂R4	100	100	100
试剂R5	100	100	100
充分混匀后室温静置30min，于545nm测定吸光度，记为A空白管、A测定管、A标准管。空白管和标准管只需测定1-2次。