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Cat. Number

HK21366-96S

Chemical Name

HK21366-96S 尿酸含量测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

尿酸为嘌呤代谢的终末产物，嘌呤代谢紊乱、能量代谢异常及肾脏对尿酸的排泄障碍等均可引起血浆尿酸水平升高或降低，进而导致多种疾病如通风、肾病、心血管疾病的发生，尿酸含量的测定在临床诊断中有着重要的指导意义。

测定原理：

尿酸酶催化尿酸分解为尿囊素、CO2和H2O2，H2O2氧化亚铁氰化钾中的Fe2+生成Fe3+，Fe3+进一步与4-氨基安替比林和酚反应生成红色醌类化合物，在505nm处有特征吸收峰，通过测定505nm处的吸光值来计算尿酸的含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、蒸馏水、冰、EP管。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

血清（浆）或尿液：直接检测。若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前加入3 mL 试剂R1，充分混匀后备用；用不完的试剂2-8℃保存。2-8℃保存1 周。（1 瓶粉剂溶解后可做100T，为了延长使用时间，此产品多给1 瓶粉剂）

2、试剂R3：临用前加入6 mL 试剂R1，充分混匀后备用；用不完的试剂2-8℃可保存4 周。

3、试剂R4：临用前加入3 mL 试剂R1，充分混匀后备用；用不完的试剂2-8℃可保存4 周。

4、试剂R5：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入6 mL 试剂R1，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。-20℃可保存4 周。

5、试剂R6：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入6 mL 试剂R1，充分混匀后备用；用不完的试剂-20℃保分装保存，避免反复冻融。-20℃可保存4 周。

6、标准品：5 μmol/mL 尿酸溶液。

7、工作液A 的配制：用于样本测定管、空白管及标准管的检测，按照试剂R2：试剂R3：试剂R4：试剂R5：试剂R6=1:1:1:1:2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议2 小时内用完。

8、工作液B 的配制：用于样本对照管的检测，按照试剂R2：试剂R3：试剂R4：试剂R5：试剂R1=1:1:1:1:2 的比例配制，根据样本量现配现用，配后建议2 小时内用完。

三、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备：将5μmol/mL标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 μmol/mL的标准溶液备用。

3. 操作表：(在1.5 mL离心管/96孔板中)

试剂名称	对照管	测定管	标准管	空白管
样本	50	50	-	-
标准溶液	-	-	50	-
蒸馏水	-	-	-	50
工作液A	-	150	150	150
工作液B	150	-	-	-
旋涡混匀，37℃水浴或恒温培养箱中准确反应30min。于微量玻璃比色皿/96孔板，测定505nm处吸光值A，分别记为A对照管、A测定管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管，标准曲线和空白管只需测1-2次。