服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21362-96S |
||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21362-96S 木质素过氧化物酶(LiP)测试盒(酶标板法) |
||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
100T/96S |
||||||||||||||||||||||
| References | 木质素过氧化物酶（EC1.11.1.14）（Lip）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，是木质素的生物降解过程中的主要木质素降解酶类。Lip 在饲料资源开发以及废水、废物处理领域有着广阔的应用前景。 检测原理： 藜芦醇可以被Lip 催化发生氧化反应，其产物藜芦醛在310nm 处有最大吸收峰，以藜芦醇为反应底物，通过测定310nm 处藜芦醛的吸光值，可以判定Lip 的酶活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声波细胞破碎仪、研钵/匀浆器、微量玻璃比色皿/96 孔（UV 板）、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照样本质量（g）：试剂R1体积（mL）为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1）加入试剂R1，冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂R1体积（mL）为 500~1000:1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂R1）加入试剂R1，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率300W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min），10000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。 3、培养液或其他液体：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。 二、测定步骤 1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至310nm，蒸馏水调零。 2、测定前根据实验用量取出部分试剂R1、试剂R2、试剂R3置于37℃预热10min 以上。若一次性测定样本过多，可根据使用量将试剂R1、R2、R3按6:2:1 比例配成工作液后进行预热，测定时按照20μL 样本+180μL 工作液加入微量玻璃比色皿/96 孔（UV 板）进行测定。 3、加样表（在微量玻璃比色皿/96 孔（UV 板）中依次加入下列试剂)：
将上述试剂分别加入微量玻璃比色皿/96 孔（UV 板）后迅速吹打混匀，从加完最后一个试剂开始计时，记录第15s 的吸光值A1，将混合液置于37℃水浴锅/恒温培养箱培养5min（培养箱有控温功能的可以将温度调至37℃），取出测定5min15s 时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1，注意保证测定时间的准确性。 三、Lip 活力的计算 A．用微量石英比色皿测定的计算公式如下： 1.按样本蛋白质浓度计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每mg 组织蛋白每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/mg prot）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样×Cpr)÷T 2.按样本质量计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每g 组织每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/g 质量）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×W)÷T 3.按细菌/细胞数量计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每104 细菌/细胞每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/104 cell）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T 4. 按照样本体积计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每mL 血清或液体样本每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/mL）=ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷V 样÷T ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm； d:比色皿光径，0.6cm； V 反总：反应总体积； V 样：加入样本体积， V 样总：提取液体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； T：反应时间，5 min； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 B．用96 孔UV 板测定的计算公式如下： 1. 按样本蛋白质浓度计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每mg 组织蛋白每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/mg prot）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样×Cpr)÷T 2. 按样本质量计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每g 组织每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/g 质量）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×W)÷T 3. 按细菌/细胞数量计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每104 细菌/细胞每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需的酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/104 cell）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T 4. 按照样本体积计算 酶活定义：37℃，pH4.5 条件下，每mL 血清或液体样本每分钟氧化1nmol 藜芦醇所需酶量为一个酶活单位。 Lip 活性（U/mL）=ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷V 样÷T ε：藜芦醛摩尔消光系数：9300L/mol/cm； d:比色皿光径，0.6cm； V 反总：反应总体积； V 样：加入样本体积； V 样总：提取液体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； T：反应时间，5 min； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 本试剂盒仅供科研使用! |
||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
