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| Cat. Number | HK21360-96S |
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| Chemical Name | HK21360-96S 糜蛋白酶测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 糜蛋白酶，又称胰凝乳蛋白酶，是胰腺分泌的一种蛋白水解酶，能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与 胰蛋白酶相似，但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化，对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合，如白内障摘除。 测定原理： 糜蛋白酶催化BTEE水解，产物在256nm有特征光吸收；通过测定256nm光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）1：5-10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清即粗酶液。 2. 血清（浆）：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前溶于1.6 mL 甲醇中，再用水定容至10 mL。可分装后-20℃保存，避免反复冻融。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至256nm，蒸馏水调零。 2、试剂R1置于25℃水浴中保温30min。 3、样本测定：
将上述试剂分别加入微量石英比色皿/96 孔UV 板后充分混匀，于256nm 处测定初始吸光值A1 和3min 时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。 四、糜蛋白酶活性计算公式 A、按微量石英比色皿计算： 1、按样本蛋白浓度计算 活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟水解1μmol BTEE 为一个酶活单位。 糜蛋白酶活(U/mg prot)=(ΔA×V 反总÷ε÷d) ÷(Cpr×V 样)÷T 2、按样本质量计算 活性单位定义：25℃每克样本每分钟水解1μmol BTEE 为一个酶活单位。 糜蛋白酶活(U/g 质量)= (ΔA×V 反总÷ε÷d) ÷(W×V 样÷V 提取)÷T 3、按血清（浆）体积计算 活性单位定义：25℃每毫升血清（浆）每分钟水解1μmol BTEE 为一个酶活单位。 糜蛋白酶活(U/mL )=(ΔA×V 反总÷ε÷d)÷V 样÷T V 样：加入反应体系中粗酶液体积； Cpr：粗酶液蛋白浓度，mg/mL，需要另外测定； W：样本质量，g； V反总：反应总体积； V 提取：加入提取液体积； T：反应时间，3min； ε：BTEE 消光系数，0.964mL/μmol/cm； d：比色皿光径，1cm。 B、按96 孔UV 板计算： 将上述计算公式中的d-1cm 改为d-0.6cm（96 孔板光径）进行计算即可。 注意事项： 1. 当ΔA 大于0.15 或者吸光值大于1 时，建议将样本用提取液稀释后测定，注意计算公式中乘以稀释倍数。 2. 当ΔA 小于0.04 时，建议将样本浓缩或者增加样本体积进行测定，注意计算公式除以浓缩倍数或者改变体积。 本试剂盒仅供科研使用! |
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