HK21358-96S 锰过氧化物酶(MnP)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

服务热线：13917250134「同微信」

您的位置：首页>>分析化学>>试剂盒>>HK21358-96S 锰过氧化物酶(MnP)测试盒(酶标板法)

产品中心

/ Products Classification 点击展开+

Cat. Number

HK21358-96S

Chemical Name

HK21358-96S 锰过氧化物酶(MnP)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

锰过氧化物酶（Mnp）（EC1.11.1.13）是一种普遍存在于细菌和真菌中的微生物木质素分解酶，在微生物木质素分解系统中起着关键作用，它可以有效的降解木质素以及废水和土壤中比较难降解的化合物，在生物制浆、生物漂白和污染物的生物降解等工业领域具有广泛应用。

测定原理：

锰过氧化物酶在Mn2+环境下，可将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，四邻甲氧基连酚在465nm 处有吸收峰，通过检测465nm 处吸光值的变化，可测定锰过氧化物酶的活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声波细胞破碎仪、研钵/匀浆器、1mL玻璃比色皿、震荡仪、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶	2-8℃
试剂R4	液体×1支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照样本质量（g）：试剂R1体积（mL）为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1）加入试剂R1，冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：试剂R1体积（mL）为 500-1000:1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂R1）加入试剂R1，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率30%或300W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min），10000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。

3、液体样本：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。

二、试剂准备

试剂R4：临用前根据实验所需量按照试剂R4（μL）：蒸馏水（μL）=1:49 的比例配制，现用现配。

三、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至465nm，蒸馏水调零。

2、测定前根据实验用量取出部分试剂R1、试剂R2、试剂R3和试剂R4置于37℃（哺乳动物）或25℃（其他动物）预热10min 以上。

3、加样表（在 1mL 玻璃比色皿中依次加入下列试剂)：

试剂名称（uL）	测定管	空白管
样本	20	-
蒸馏水	-	20
试剂R1	100	100
试剂R2	20	20
试剂R3	40	40
试剂R4	20	20

将上述试剂分别加入1mL玻璃比色皿后迅速吹打混匀，记录第30s 的吸光值A1以及10min30s 时的吸光值A2，计算ΔA =A2-A1。若一次性测定样本过多，可根据使用量将试剂R1、R2、R3、R4按5:1:2:1 比例配成工作液后进行预热，测定时按照100μL 样本+900μL 工作液加入1mL 玻璃比色皿进行测定。

四、Mnp 活力的计算

1.按样本蛋白质浓度计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每mg 组织蛋白每分钟氧化1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活单位。

Mnp 活性（U /mg prot）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样×Cpr)÷T

2.按样本质量计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每g 组织每分钟氧化1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活单位。

Mnp 活性（U /g 质量）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×W)÷T

3.按细菌/细胞数量计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每104 细菌/细胞每分钟氧化1nmol 愈创木酚所需的酶量为一个酶活单位。

Mnp 活性（U /10⁴ cell）= ΔA×V 反总÷(ɛ×d)×109÷(V 样÷V 样总×细胞数量)÷T

4、按照样本体积计算

酶活定义：pH4.5 条件下，每mL 血清或液体样本每分钟消耗1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。