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| Cat. Number | HK21356-48S |
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| Chemical Name | HK21356-48S 滤纸酶(FPA)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系，能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖，滤纸酶是其中的一个组分，研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。 测定原理： 滤纸酶FPA水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物，在540nm处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比，可测定计算得滤纸酶的活力。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、超声破碎仪、微量玻璃比巴皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管(2 mL)。 产品组成：
实验步骤: 注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1.组织：按照质量(g）︰蒸馏水体积(mL)为1∶5~10的比例(建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，冰浴匀浆后于4℃，12000 rpm离心10 min，取上清置于冰上待测。 2.细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管中，离心后弃上清；按照细胞或细菌数量(104个)：蒸馏水体积(mL)为500~1000 : 1的比例(建议500万细胞或细菌加入1mL蒸馏水)，冰浴超声波破碎细胞或细菌(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3 min)；然后4℃，12000 rpm离心10min，取上清置于冰上待测。 3.培养液或其它液体：直接检测。(若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定) 二、试剂准备 1.滤纸条：常温防潮保存。 2.标准品: 10mg 无水葡萄糖。临用前加入1 mL蒸馏水溶解，配成10mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8°C保存两周。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540 nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、将10mg/mL标准液用蒸馏水稀释为1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2mg/mL 的标准溶液备用。 3、取100uL样本沸水浴10 min（盖紧，防止水分散失)，放置常温后作为对照管。 4、操作表：(在2 mL离心管中操作，其中对照管与测定管用有滤纸的EP管，空白管与标准管无需滤纸)
四、FPA活性计算 1、标准曲线的绘制： 根据标准管的浓度(x，mg/mL)和吸光度ΔA标准(y，ΔA标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度(x，mg/mL) 。 2、FPA活性的计算： (1）按蛋白浓度计算 酶活定义：每 mg 蛋白每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。 FPA酶活(U/mg prot）=x×V提取÷(V提取×Cpr）÷T (2）按样本质量计算 酶活定义：每g样品每分钟分解滤纸产生1 mg葡萄糖为1个酶活力单位。 FPA酶活（U/g质量）=x×V提取÷W÷T (3）按照细胞或细菌数量计算 酶活定义：每104个细胞每分钟分解滤纸产生1 mg 葡萄糖为1个酶活力单位。 FPA酶活（U/104 cell)=x×V提取÷细胞数量（万个)÷T (4）按液体体积计算 酶活定义：每mL样本每分钟分解滤纸产生1 mg 葡萄糖为1个酶活力单位。 FPA酶活（U/mL)=x×V样÷V样÷T V提取：提取液（蒸馏水）体积; V样：加入的样本体积; Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定； W：样本质量，g; T：反应时间，30 min。 注意事项: 1.用干净的镊子取出滤纸条，带手套将滤纸条卷成小卷放入Ep管底部。 2.当A或ΔA超过1时，建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定，计算公式中乘以稀释倍数。3.显色结束吸取检测液时注意枪头不要碰到滤纸条，以免带入毛状物，影响测定结果。 本试剂盒仅供科研使用! |
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