HK21355-24S 滤纸酶(FPA)测试盒(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21355-24S

Chemical Name

HK21355-24S 滤纸酶(FPA)测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

纤维素酶是由微生物产生的多组分的酶系，能水解纤维素β-1,4葡萄糖苷键生成葡萄糖，滤纸酶是其中的一个组分，研究滤纸酶活力对纤维素酶的研究具有非常重要的意义。

测定原理：

滤纸酶FPA水解滤纸产生的还原糖能与3,5-二硝基水杨酸生成红棕色氨基化合物，在540nm处有最大光吸收，在一定范围内反应液颜色深浅与还原糖的量成正比，可测定计算得滤纸酶的活力。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、超声破碎仪、1mL玻璃比巴皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管(2 mL)。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
滤纸条	50mg×50条	常温
标准品	粉剂×1 支	2-8℃

实验步骤:

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1.组织：按照质量(g）︰蒸馏水体积(mL)为1∶5~10的比例(建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，冰浴匀浆后于4℃，12000 rpm离心10 min，取上清置于冰上待测。

2.细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管中，离心后弃上清；按照细胞或细菌数量(10⁴个)：蒸馏水体积(mL)为500~1000 : 1的比例(建议500万细胞或细菌加入1mL蒸馏水)，冰浴超声波破碎细胞或细菌(功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间 3 min)；然后4℃，12000 rpm离心10min，取上清置于冰上待测。

3.培养液或其它液体：直接检测。(若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定)

二、试剂准备

1.滤纸条：常温防潮保存。

2.标准品: 10mg 无水葡萄糖。临用前加入1 mL蒸馏水溶解，配成10mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8°C保存两周。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至540 nm，蒸馏水调零。

2、将10mg/mL标准液用蒸馏水稀释为0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2mg/mL 的标准溶液备用。

3、取200uL样本沸水浴10 min（盖紧，防止水分散失)，放置常温后作为对照管。

4、操作表：(在2 mL离心管中操作，其中对照管与测定管用有滤纸的EP管，空白管与标准管无需滤纸)

试剂名称	对照管	测定管	标准管	空白管
煮沸样本	200	-	-	-
样本	-	200	-	-
每支EP管中放入一个卷状滤纸条（注意要放入底部)，作为底物。			-	-
标准溶液	-	-	200	-
蒸馏水	-	-	-	200
试剂R1	500	500	500	500
混匀，50°C水浴锅中准确反应30 min
试剂R2	800	800	800	800
混匀，沸水浴5 min(盖紧，防止水分散失)，取出后立即冷却至室温，测定540nm处吸光值A，分别记为A对照管、A测定管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管，标准曲线和空白管只需检测1-2次。