HK21353-48S 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒(可见分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21353-48S

Chemical Name

HK21353-48S 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

硫氧还蛋白氧化还原酶TrxR 是一种NADPH 依赖的包含FAD 结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR 与GR 活性类似，催化GSSG 还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

测定原理：

TrxR 催化NADPH 还原DTNB 生成TNB 和NADP+，TNB 在412nm 有特征吸收峰，但还原型谷胱甘肽与DTNB同样能反应生成TNB，因此本试剂盒利用2-乙烯吡啶抑制样本中原有的还原型谷胱甘肽，通过测定412nm 波长处TNB 的增加速率，即可计算TrxR 活性。

需自备的仪器和用品：

低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）：试剂R1体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待检测。

2、细菌、细胞：按照细胞数量（10⁴个）：试剂R1体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂R1），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

注：测定前将上清液与试剂四以50：1的体积比混匀（即取100μL上清液加入2μL试剂R4混合）37℃水浴30min后至冰上。

二、试剂准备

1、试剂R3：临用前取1 支加入3mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃保存1 周。

2、试剂R4：临用前根据样本数量将试剂四用无水乙醇稀释10 倍后使用。

三、测定步骤

1.分光光度计预热30min 后，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。

2. 试剂R1在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。

3. 操作表：在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入

试剂名称(uL)	空白管	测定管
试剂R2	100	100
试剂R3	100	100
试剂R1	800	700
上清液	-	100
空白管：迅速混匀后于412nm 测定10s时吸光度，然后将比色皿放入37℃水浴5min 后混匀立即测定310s 吸光度，记为A1 和A2。ΔA 空白管=A2-A1。
空白管：迅速混匀后于412nm 测定10s时吸光度，然后将比色皿放入37℃水浴5min 后混匀立即测定310s 吸光度，记为A1 和A2。ΔA 空白管=A2-A1。