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Cat. Number
HK21352-48S
Chemical Name
HK21352-48S 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

硫氧还蛋白过氧化物酶TPX 属于过氧化物酶家族,在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化 作用,功能与 GPX 类似,也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TPX 普遍存在于各种生 物体内,如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌,在进化上高度保守。 TPX 与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。TPX 的主要功能包括细胞脱 毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)属于过氧化物酶家族,普遍存在于各种生物体内,主要还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用,功能与GPX 类似,也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。具有抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应等功能。


测定原理:   

TPX 催化H2O2 氧化二硫苏糖醇(DTT),H2O2 的吸收波长为240nm,通过测定240nm 吸光度的下降速率,通过对照减去过氧化氢酶(CAT)催化分解的H2O2 ,即可计算出TPX 活性。因此本试剂盒可以同时测定样品TPX 和CAT 活性。


所需的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿/96 孔UV 板和蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
试剂R1液体×1瓶室温
试剂R2液体×1瓶-20℃
试剂R3液体×1瓶2-8℃


实验步骤:

一、样本制备:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL试剂R1)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待检测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂R1体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入1mL 试剂R1),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3 s,间隔7s,总时间3min),然后8000rpm,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

二、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min 后,调节波长到240 nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂R1和试剂R2在25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴预热30min。

3. 操作表:在1mL 石英比色皿或96 孔UV 板中依次加入:

试剂名称(uL)CAT 活性测定管总活性测定管
上清液44
试剂R1180-
试剂R2-180
试剂R31616
           CAT 活性测定管:迅速混匀后于240 nm 测定10 s 和130s 吸光度,记为A1 和A2。
             总活性测定管:迅速混匀后于240 nm 测定10 s 和130s 吸光度,记为A3 和A4。

注意:每个样品都需要做对照管,以减去过氧化氢酶(CAT)催化降解的H2O2

四、结果计算:

a. 使用微量比色皿测定的计算公式如下:

(1)按蛋白浓度计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/mg prot)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

总活性(nmol/min/mg prot)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

TPX 活性(nmol/min/mg prot)=总活性-CAT 活性

(2)按样本质量计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化1nmol H2O2  降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/g)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T

总活性(nmol/min/g)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T

TPX 活性(nmol/min/g)=总活性-CAT 活性

(3)按细胞数量计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每104 个细胞每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

总活性(nmol/min/104 cell)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

TPX 活性(nmol/min/104 cell)=总活性-CAT 活性

(4)按液体体积计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/mL)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T

总活性(nmol/min/mL)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T

TPX 活性(nmol/min/mL)=总活性-CAT 活性

ε:H2O2 的微摩尔消光系数,43600 L/ mol/cm=0.0436 L/ μmol/cm;

d:比色皿光径,1cm;

V 反总:反应体系总体积(L);

Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL);

V 样:加入反应体系中上清液体积(mL);

T:反应时间(min),2 min;

W:样品鲜重,g;

V 样总:提取液体积。

b. 使用96 孔UV 板测定的计算公式如下:

(1)按蛋白浓度计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol H2O2  降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/mg prot)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

总活性(nmol/min/mg prot)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T

TPX 活性(nmol/min/mg prot)=总活性-CAT 活性

(2)按样本质量计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化1nmol H2O2  降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/g)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T

总活性(nmol/min/g)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T

TPX 活性(nmol/min/g)=总活性-CAT 活性

(3)按细胞数量计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每104 个细胞每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

总活性(nmol/min/104 cell)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

TPX 活性(nmol/min/104 cell)=总活性-CAT 活性

(4)按液体体积计算

活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。

CAT 活性(nmol/min/mL)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T

总活性(nmol/min/mL)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T

TPX 活性(nmol/min/mL)=总活性-CAT 活性

ε:H2O2 的微摩尔消光系数,43600 L/ mol/cm=0.0436 L/ μmol/cm;

d:96 孔板光径,0.5cm;

V反总:反应体系总体积;

Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL);

V 样:加入反应体系中上清液体积(mL);

T:反应时间(min),2 min;

W:样品鲜重,g;

V 样总:提取液体积。


本试剂盒仅供科研使用!


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