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/ Products Classification 点击展开+Cat. Number | HK21352-48S |
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Chemical Name | HK21352-48S 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(酶标板法) |
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Qty 1 |
100T/48S |
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References | 硫氧还蛋白过氧化物酶TPX 属于过氧化物酶家族,在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化 作用,功能与 GPX 类似,也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TPX 普遍存在于各种生 物体内,如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌,在进化上高度保守。 TPX 与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。TPX 的主要功能包括细胞脱 毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)属于过氧化物酶家族,普遍存在于各种生物体内,主要还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用,功能与GPX 类似,也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。具有抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应等功能。 测定原理: TPX 催化H2O2 氧化二硫苏糖醇(DTT),H2O2 的吸收波长为240nm,通过测定240nm 吸光度的下降速率,通过对照减去过氧化氢酶(CAT)催化分解的H2O2 ,即可计算出TPX 活性。因此本试剂盒可以同时测定样品TPX 和CAT 活性。 所需的仪器和用品: 紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL 石英比色皿/96 孔UV 板和蒸馏水。 产品组成:
实验步骤: 一、样本制备: 1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL试剂R1)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待检测。 2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂R1体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入1mL 试剂R1),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3 s,间隔7s,总时间3min),然后8000rpm,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体:直接测定。 二、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min 后,调节波长到240 nm,用蒸馏水调零。 2. 试剂R1和试剂R2在25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴预热30min。 3. 操作表:在1mL 石英比色皿或96 孔UV 板中依次加入:
注意:每个样品都需要做对照管,以减去过氧化氢酶(CAT)催化降解的H2O2。 四、结果计算: a. 使用微量比色皿测定的计算公式如下: (1)按蛋白浓度计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/mg prot)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T 总活性(nmol/min/mg prot)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T TPX 活性(nmol/min/mg prot)=总活性-CAT 活性 (2)按样本质量计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/g)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T 总活性(nmol/min/g)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T TPX 活性(nmol/min/g)=总活性-CAT 活性 (3)按细胞数量计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每104 个细胞每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T 总活性(nmol/min/104 cell)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T TPX 活性(nmol/min/104 cell)=总活性-CAT 活性 (4)按液体体积计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/mL)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T 总活性(nmol/min/mL)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T TPX 活性(nmol/min/mL)=总活性-CAT 活性 ε:H2O2 的微摩尔消光系数,43600 L/ mol/cm=0.0436 L/ μmol/cm; d:比色皿光径,1cm; V 反总:反应体系总体积(L); Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL); V 样:加入反应体系中上清液体积(mL); T:反应时间(min),2 min; W:样品鲜重,g; V 样总:提取液体积。 b. 使用96 孔UV 板测定的计算公式如下: (1)按蛋白浓度计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/mg prot)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T 总活性(nmol/min/mg prot)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T TPX 活性(nmol/min/mg prot)=总活性-CAT 活性 (2)按样本质量计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每克样本每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/g)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T 总活性(nmol/min/g)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T TPX 活性(nmol/min/g)=总活性-CAT 活性 (3)按细胞数量计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每104 个细胞每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/104 cell)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T 总活性(nmol/min/104 cell)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T TPX 活性(nmol/min/104 cell)=总活性-CAT 活性 (4)按液体体积计算 活性单位(U)定义:在25℃或者37℃中,每毫升液体每分钟催化1nmol H2O2 降解为一个酶活力单位。 CAT 活性(nmol/min/mL)=(A1-A2) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T 总活性(nmol/min/mL)=(A3-A4) ÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T TPX 活性(nmol/min/mL)=总活性-CAT 活性 ε:H2O2 的微摩尔消光系数,43600 L/ mol/cm=0.0436 L/ μmol/cm; d:96 孔板光径,0.5cm; V反总:反应体系总体积; Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL); V 样:加入反应体系中上清液体积(mL); T:反应时间(min),2 min; W:样品鲜重,g; V 样总:提取液体积。 本试剂盒仅供科研使用! |
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