HK21349-48S 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(显色法)(紫外分光光度法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21349-48S

Chemical Name

HK21349-48S 硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)测试盒(显色法)(紫外分光光度法)

Qty 1

50T/48S

References

硫氧还蛋白过氧化物酶TPX 属于过氧化物酶家族，在体内主要通过还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与 GPX 类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。TPX 普遍存在于各种生物体内，如酵母、植物、动物、原生动物、寄生虫、细菌和古细菌，在进化上高度保守。 TPX 与细胞增殖、分化、细胞凋亡及肿瘤发生调控密切相关。TPX 的主要功能包括细胞脱毒、抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应。硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）属于过氧化物酶家族，普遍存在于各种生物体内，主要还原过氧化氢和一些氢过氧化物来实现抗氧化作用，功能与GPX 类似，也是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。具有抗氧化和调节由过氧化氢介导的信号转导和免疫反应等功能。

测定原理：

TPX 催化H2O2 氧化二硫苏糖醇（DTT），通过用硫氰酸铁法检测剩余H2O2，由于形成的化合物于475nm 处的吸光值，进而计算出TPX 活性大小。

所需的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径1cm）、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×3瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶	2-8℃
试剂R4	液体×1瓶	2-8℃
试剂R5	粉剂×4瓶	2-8℃
试剂R6	液体×1瓶	2-8℃

实验步骤：

一、样本制备：

组织样本：称取约0.1g 组织（水分充足样本可取0.5g），加入1mL 提取液，在4ºC或冰浴进行匀浆。4ºC 约12,000rpm 离心10min，取上清作为待测样品。若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例进行提取

细菌/细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，在4ºC 或冰浴进行匀浆。4ºC 约12,000rpm 离心10min，取上清作为待测样品。若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1 的比例进行提取。

液体样本：直接测定。

二、试剂准备

试剂R2：用前甩几下使试剂落入底部，每支加4mL 蒸馏水溶解，三天内用完。

试剂R3：用前甩几下使试剂落入底部，取11μL至新EP 管中，再加1.1mL 蒸馏水混匀，接着再用蒸馏水稀释100 倍备用，作为标准品母液（1μmoL/mL）

试剂R5：用前甩几下使试剂落入底部，每支加3mL 蒸馏水溶解，现配现用。

三、测定步骤

1、可见分光光度计预热30 min，调节波长到475nm，蒸馏水调零。

2、标准曲线：

标准品母液（1μmoL/mL）：即稀释100 倍后备用的试剂R3。把母液稀释成六个梯度：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1μmoL/mL。

2、所有试剂解冻至室温（25℃），在EP 管中依次加入：

试剂名称（uL）	测定管	空白管	标准管
样本	20	-	-
蒸馏水	-	20	20
标准溶液	-	-	50
试剂R1	330	330	430
试剂R2	100	100	-
混匀，室温（25℃）孵育5min
试剂R3	50	50	-
混匀，室温（25℃）反应2min
试剂R4	50	50	50
试剂R5	100	100	100
试剂R6	50	50	50
混匀，测定管需室温（25℃）12000rpm 离心2min，再同空白管一起取全部澄清液体至1mL 玻璃比色皿（光径1cm）中，立即于475nm 处读值，△A=A 空白-A 测定。

【注】若测定管没有颜色即TPx 活性高，需减少样本加样体积V1(如减至5μL，则试剂一相应增加)，或缩短反应时间T(如室温反应2min 缩至1min 或更短)；若△A 在零附近即测定管颜色接近空白管，需增加加样体积V1(如增至40μL，则试剂R1相应减少)，或延长反应时间T(如延至5min 或更长)；则改变后的V1 和T 需代入计算公式重新计算。

四、结果计算：

标准曲线：x 是H2O2 摩尔质量（μmoL），y 为吸光值△A 。

2. 按蛋白浓度计算：

酶活定义：每毫克蛋白每分钟降解1μmoL H₂O₂为1 个酶活单位。

TPx 酶活(μmoL/min/mg prot)=[(△A+0.0256)÷14.701]÷(Cpr×V1)÷T×D

3. 按样本质量计算：

酶活定义：每克样本每分钟氧化降解1μmoL H₂O₂ 为1 个酶活单位。

TPx 酶活(μmoL/min/g 鲜重)=[(△A+0.0256)÷14.701] ÷(W×V1÷V)÷T×D

4. 按细胞数量计算：

酶活定义：每10⁴ 个细胞每分钟降解1μmoLH₂O₂ 为1 个酶活单位。

TPx 酶活(μmoL/min/10⁴ cell)=[(△A+0.0256)÷14.701]÷(细胞数量×V1÷V)÷T×D

5. 按液体体积计算：