HK21348-96S 磷脂酶D(PLD)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21348-96S

Chemical Name

HK21348-96S 磷脂酶D(PLD)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

磷脂酶D（EC3.1.4.4）即磷脂酰胆碱水解酶，是催化磷酸二酯键水解和碱基交换反应的一类酶的总称，广泛存在于高等动植物和细菌等多种生物体中，具有参与细胞脂质代谢、信号传导、生物膜形成的抗逆境胁等生理功能。

测定原理：

磷脂酶D催化水解磷脂酰胆碱末端的磷脂酰二酯键生成磷脂酸和胆碱，胆碱在胆碱氧化酶催化作用下生成甜菜碱和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的作用下将4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉红色物质，在500nm处有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、超速冷冻离心机、可调式移液枪、天平、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、蒸馏水、无水乙醇和冰。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液1	液体×1瓶	2-8℃
提取液2	液体×2支	-20℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃
试剂R3	粉剂×2瓶	2-8℃
试剂R4	液体×1瓶	2-8℃
标准品	液体×1支	2-8℃

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照质量(g)∶提取液1体积(mL)为1:5~10的比例加入提取液，建议称取约0.1g样本，加入0.99m提取液1和0.0lmL提取液2，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心5min；取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂R1。

2、细胞：按照细胞数量（10⁴个)：提取液体积(mL)为500~1000:1的比例（建议500万细胞加入0.99mL提取液1和0.01mL提取液2)，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min)；然后于4℃，10000g离心5min；取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL 试剂R1。

3、血清（浆）：直接测定。

二、试剂准备

1．提取液2：试剂易挥发，用完后快速拧盖，封口膜缠口；

2．试剂R3：试剂放于试剂瓶内玻璃管中临用前取一支加入1.26 mL乙醇充分溶解后取上清使用；2-8℃可以分装保存2周，避免反复冻融；

3．标准品：50umol/mL胆碱溶液，临用前用试剂R1稀释100 倍即500nmol/mL标准溶液备用（可以取10uL 50umol/mL胆碱溶液加入990uL试剂R1混匀即500nmol/mL标准溶液）。

三、测定步骤

1、可见分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到500nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、样本测定:

试剂名称（uL）	空白管	标准管	测定管
试剂R1	20	-	-
试剂R2	30	30	30
标准品	-	20	-
样本	-	-	20
试剂R3	20	20	20
充分混匀，30C反应30min，沸水浴5min，打开盖子，自然冷却2min。
试剂R4	140	140	140
30℃反应30min，测定500nm处吸光值，分别记为A空白管、A标准管和A测定管。计算△A标准=A标准管-A空白管，△A测定=A测定管-A空白管。空白管和标准管只需做1-2次。