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| Cat. Number | HK21334-48S |
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| Chemical Name | HK21334-48S 亮氨酸氨基肽酶(LAP)检测试剂盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/48S |
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| References | 亮氨酸氨基肽酶(LAP)是一种膜结合酶，广泛存在于肝、胆、胰等组织中，参与组织蛋白和某些肽类的降解更新。各类肝病患者因肝细胞损伤，血清LAP的活性均有不同程度的升高，LAP可以作为各类肝病的一项初步检测指标，特别是肝癌鉴别诊断的指标。 检测原理： LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。 需自备的仪器和用品： 天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、丙酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照组织质量（g）：试剂R1体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 2、细胞或细菌：按照细胞数量（104个）：试剂R1体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂R1），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3、液体：直接检测。 二、试剂准备 试剂R2：临用前加入5 mL 丙酮溶解。 三、测定步骤 1、分光光度计预热30min以上，波长调至405nm，蒸馏水调零。 2、加样表：在1mL玻璃比色皿中分别加入下列试剂
四、LAP酶活计算 1、按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 LAP（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(V样×Cpr) ÷T 2、按样本质量计算： 单位的定义：每g组织每分钟生成1nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 LAP（U/g 质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(W× V样÷V样总) ÷T 3、按细胞数量计算： 单位的定义：每1万个细胞每分钟生成1 nmol对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 LAP（U/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(500×V样÷V样总) ÷T 4、按液体体积计算： 单位的定义：每mL液体每分钟生成1nmol的对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 LAP（U/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷V样÷T V 反总：反应体系总体积，1×10-3L； ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.87×103L/mol /cm； 109：单位换算系数， 1mol=109nmol； d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积； V样总：加入试剂R1体积； T：反应时间，3min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，需单独测定； W：样本质量，g； 500：细胞总数，500万。 注意事项： 1、ΔA大于0.5时或者A值大于1.5时建议将样本上清用试剂R1稀释后再进行测定。 2、空白管的ΔA变化小于0.01。 本试剂盒仅供科研使用! |
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