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| Cat. Number | HK21330-48S |
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| Chemical Name | HK21330-48S 可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒(紫外分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/48S |
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| References | 可溶性淀粉合成酶(SSS)（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。 测定原理： SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪、1mL石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献) 粗酶液制备：称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4C离心10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前取1瓶试剂R2A加入8mL试剂R1，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入1支试剂R2B和1支试剂R2C混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。 2、试剂R3：临用前取1瓶试剂R3B加入5mL试剂R3A溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。 3、试剂R4：临用前先离心，取13L试剂R4加入4.16mL溶解好的试剂R3混合备用(约53T)，现用现配，也可根据样本量按比例配制。 4、试剂R5：临用前取1瓶试剂R5B加入8mL试剂R5A和1支试剂R5C溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。 5、试剂R6：临用前取1支加入208 uL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。 6、试剂R7：临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂-20°C分装保存8周，避免反复冻融。 三、测定步骤 1.紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2.样本测定：在EP管内按顺序加入
混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1. 注意：试剂R2如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。 四、SSS活性计算 1、按样本蛋白浓度计算: 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。 SSS活性（U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V测]÷(Cpr×V样÷V反总×V上清)÷T 此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。 2、按照样本质量计算: 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmo1 NADPH定义为一个酶活力单位。 SSS活性（U/g质量)=[ΔA÷(ε×d)×V测]÷(W÷V提取×V样÷V反总×V上清)÷T V测：测量体积; V样：加入样本体积; V反总：反应体积; V上清：加入上清液体积; V提取：加入提取液体积; T：反应时间， 20min; ε: NADPH消光系数,6.22×10-3mL/(nmolcm); d：石英比色皿光径，1cm; Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL; W：样本质量，g. 本试剂盒仅供科研使用! |
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