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Cat. Number

HK21330-24S

Chemical Name

HK21330-24S 可溶性淀粉合成酶(SSS)测试盒(紫外分光光度法)

Qty 1

25T/24S

References

可溶性淀粉合成酶(SSS)（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。

测定原理：

SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪、1mL石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

粗酶液制备：称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4C离心10min，取上清，置冰上待测。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前取1瓶试剂R2A加入8mL试剂R1，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入1支试剂R2B和1支试剂R2C混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

2、试剂R3：临用前取1瓶试剂R3B加入5mL试剂R3A溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

3、试剂R4：临用前先离心，取13L试剂R4加入4.16mL溶解好的试剂R3混合备用(约53T)，现用现配，也可根据样本量按比例配制。

4、试剂R5：临用前取1瓶试剂R5B加入8mL试剂R5A和1支试剂R5C溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

5、试剂R6：临用前取1支加入208 uL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

6、试剂R7：临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂-20°C分装保存8周，避免反复冻融。

三、测定步骤

1.紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2.样本测定：在EP管内按顺序加入

试剂名称(uL)	测定管
样本	200
试剂R2	270
混匀，30℃保温20min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却
试剂R4	150
混匀，30℃保温30min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g，常温离心10min，取上清液。37℃预热试剂五和上清液。
上清液	450
试剂R5	300
试剂R6	15
试剂R7	15