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| Cat. Number | HK21325-96S |
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| Chemical Name | HK21325-96S 抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗坏血酸代谢的关键酶之一。APX 具有多种同功酶，分别定位于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA，是植物AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影响到AsA 的含量，APX 与AsA 具有一定的负相关性。 测定原理： APX 催化H2O2 氧化AsA，在290nm通过测定AsA 氧化速率，来计算得APX 活性。 需自备的仪器和用品： 低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔UV 板、移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 按照组织质量（g）：试剂R1体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂R1）进行冰浴匀浆。13000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。 二试剂准备 1、试剂R2：临用前加5 mL 蒸馏水充分溶解。 2、试剂R3：临用前根据样本量取适量试剂R3用蒸馏水稀释8 倍使用即可。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长到290nm，用蒸馏水调零。 2. 试剂R1在25℃中预热30min 以上。 3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入20μL 蒸馏水、140μL 预热的试剂R1、20μL 试剂R2和20μL 试剂R3，迅速混匀后在290nm 测定10s 和130s 光吸收A1 和A2，△A 空白管=A1-A2。 4. 测定管：依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入20μL 上清液、140μL 预热的试剂R1、20μL 试剂R2和20μL 试剂R3，迅速混匀后在290nm 测定10s 和130s 光吸收A3 和A4，△A 测定管=A3-A4。 四、APX 活性计算 a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1 个酶活单位。 APX(U/mg prot) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(Cpr×V 样)÷T （2）按样本质量计算 活性单位定义：每克样本每分钟氧化1μmol AsA 为1 个酶活单位。 APX(U/g 质量) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(V 样÷V 样总×W)÷T ε：AsA 在290nm 处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V 反总：反应体系总体积； 106：单位换算系数，1mol=1×106μmol； Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定； W：样本质量，g； V 样：加入反应体系中上清液体积； V 样总：加入试剂R1体积； T：催化反应时间，2min。 b.使用96 孔板测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1 个酶活单位。 APX(U/mg prot) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(Cpr×V 样)÷T （2）按样本质量计算 活性单位定义：每克样本每分钟氧化1μmol AsA 为1 个酶活单位。 APX(U/g 质量) = (ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106÷(V 样÷V 样总×W)÷T ε：AsA 在290m 处摩尔吸光系数为2.8×103 L/mol/cm； d：96 孔板光径，0.6cm； V 反总：反应体系总体积； 106：单位换算系数； Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定； W：样本质量，g； V 样：加入反应体系中上清液体积； V 样总：加入试剂R1体积； T：催化反应时间，2min。 本试剂盒仅供科研使用! |
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