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| Cat. Number | HK21323-96S |
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| Chemical Name | HK21323-96S 抗坏血酸(AsA)含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | AsA又称维生素c。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。 测定原理： 抗坏血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。 需自备的仪器和用品： 研钵/匀浆器、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液器、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。 2、细菌、细胞：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；8000g，4℃离心20min，取上清液置冰上混匀待测。 3、血清等液体：直接测定。 二、试剂准备 1．试剂R3：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用前根据用量按照试剂R3：试剂R2为1:250 的体积比例充分混匀，现用现配； 2．标准品：临用前配置，加入5.679 mL 蒸馏水充分溶解，即10 mmol/L AsA；吸取0.04mL 上述溶液，加入0.96mL蒸馏水，混匀，即400 μmol/L AsA。 三、测定步骤 1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。 2、试剂R2在25℃水浴锅中预热30min以上。 3、标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL标准液、160μL试剂R2和20μL试剂R3，迅速混匀后于265nm测定，记录30s和150s的吸光值A1和A2。ΔA标准管=A1-A2。 4、测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、160μL试剂R2和20μL试剂R3，迅速混匀后于265nm测定，记录30s和150s的吸光值A3和A4。ΔA测定管=A3-A4。 注意：如果样本数量较大。可将试剂R2与试剂R3按照8:1的体积比混匀配成工作液使用，根据样本所需现配现用，禁止一次性配完。加样顺序为180 μL工作液、20 μL上清液（或标准液），加入上清液（或标准液）即开始计时。（标准管只需测定1-2次） 四、AsA 含量计算公式 1、按蛋白浓度计算： AsA (nmol/mg prot) =（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷（Cpr×V样） 2、按样本质量计算： AsA(nmol/g 质量) =（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷(W×V样÷V样总) 3、按细胞数量计算： AsA(nmol/104 cell) =（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷(细胞数量×V样÷V样总) 4、按液体体积计算： AsA (nmol/mL) =（C标准液×ΔA测定管÷ΔA标准管×V样）÷V样 C标准液：标准液的浓度； V样总：上清液总体积； V样：加入反应体系中上清液体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 细胞数量：以104为单位计量，万。 注意事项： 1、试剂R3和标准品现配现用，配制好的 4℃保存，3 天内使用完。 2、如果样本初始吸光值大于1.4，建议将样本用试剂R1稀释后进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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